生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无致病性,属于人类肠道正常菌群(非致病性菌株),常规实验室规范操作(超净台接种、无菌耗材使用)下,对操作人员及环境无危害。该菌株分离自健康人类肠道,其生物学特性与肠道内非致病大肠杆菌高度一致,能模拟自然状态下的菌群生理代谢特征,是连接基础微生物学研究与实际应用场景的关键菌株。
形态与培养特性:属于革兰氏阴性短杆菌,具有典型的肠杆菌科形态与培养特征:
显微镜形态:菌体呈短杆状,直径 0.5-1.0μm,长度 1.0-2.0μm,常单个或成对排列,无芽孢,多数情况下具有周生鞭毛(具备运动能力,特殊染色可观察),革兰氏染色呈红色(典型革兰氏阴性菌特征);
培养要求:对营养需求较低,在普通营养琼脂(NA)、胰酪大豆琼脂(TSA)、麦康凯琼脂等培养基中均可快速生长;兼性厌氧,最适生长温度 37℃(适配人体体温),可耐受 10-45℃温度范围,生长速度快,培养 18-24 小时即可形成明显菌落;
菌落形态:在 TSA 平板上,37℃培养 24 小时形成直径 2-3mm 的菌落,圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、颜色呈乳白色(不透明);在麦康凯琼脂(选择性培养基)上,因能发酵乳糖产酸,菌落呈粉红色(区别于不发酵乳糖的沙门氏菌、志贺氏菌等致病菌),是食品与水质检测中快速鉴别大肠杆菌的重要依据。
生化与生理特性:生化反应极具代表性,是肠杆菌科菌种鉴别的核心参照:能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等多种糖类产酸产气(“发酵产酸产气” 是大肠杆菌典型特征);触酶试验阳性(区别于链球菌)、氧化酶试验阴性(肠杆菌科共性),吲哚试验阳性(能分解色氨酸产生吲哚)、甲基红试验阳性、V-P 试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性(即 “IMViC 试验” 结果为 “++--”,是大肠杆菌的经典生化鉴别标志);不产生硫化氢,不分解尿素,这些稳定的生化特性确保其在微生物鉴定实验中可作为可靠的标准对照。
未开封状态:产品主要以冻干粉(真空密封包装,含 10^7-10^8 CFU / 支活菌) 或甘油菌悬液(含 20% 甘油保护剂,-80℃保存型) 形式供应:
冻干粉:未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存,长期储存(超过 6 个月)建议放入 - 80℃冰箱,避免反复冻融(反复冻融会导致活菌率下降 50% 以上,影响菌株活性),保质期以 ATCC 官方标注为准,通常为 3 年;
甘油菌悬液:未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存,不可室温放置,保质期 1-2 年,解冻后需一次性使用,不可再次冷冻。
复苏后状态:复苏后的菌液(TSB 肉汤或 LB 肉汤培养)需在 2-8℃冷藏保存,建议 3-5 天内使用完毕(大肠杆菌代谢活跃,长期冷藏易导致菌体老化或污染);复苏后的斜面培养物(TSA 斜面)需 2-8℃冷藏保存,建议 1-2 周内传代一次,传代时使用新鲜培养基,确保菌株生化特性与形态稳定,使用前可通过涂片镜检确认菌体形态正常(无肿胀、畸形)。
复苏操作:
冻干粉复苏:无菌环境下(超净台内),向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤(TSB)或 LB 肉汤,轻轻振荡使粉末完全溶解,转移至无菌试管,37℃培养箱振荡培养(180-200rpm)12-16 小时(振荡培养可促进菌体均匀生长),待菌液呈均匀浑浊状(OD600 值约 0.6-0.8,处于对数生长期)、镜检可见典型短杆菌时,即可用于实验;
甘油菌复苏:从 - 80℃取出甘油菌后,立即用无菌枪头吸取 100μL 菌液,接种至含 5mL TSB/LB 肉汤的无菌试管中,37℃振荡培养 12-16 小时,待菌液浑浊后即可使用,剩余甘油菌需丢弃,不可再次冷冻。
传代培养:在超净台内,用无菌接种环蘸取少量复苏菌液,在 TSA 平板上分区划线(便于形成单菌落),37℃培养 18-24 小时;待平板形成单菌落后,挑取形态典型(圆形、乳白色、光滑)的单菌落,可直接用于实验,或转接至 TSA 斜面培养基,37℃培养 24 小时后,2-8℃冷藏保存;传代次数不超过 5 代,避免长期传代导致菌株遗传特性漂移(如丢失部分生化功能)。
应用操作:
基础科研领域:作为分子生物学实验的模式菌株,用于基因克隆、蛋白质表达(如构建重组质粒后转化该菌株进行扩增)、微生物代谢途径解析(如研究糖类代谢关键基因功能);
食品与水质安全检测:作为质控菌株,验证食品(如乳制品、肉制品)、饮用水中大肠杆菌及大肠菌群检测方法的准确性(如平板计数法、快速检测试剂盒),确保检测结果可靠;
临床微生物鉴定:作为阳性对照,验证生化鉴定试剂盒(如 API 20E)、微生物质谱检测系统(MALDI-TOF MS)对肠杆菌科细菌的鉴定能力,区分大肠杆菌与其他肠道致病菌;
药敏测试质控:依据 CLSI 标准,用于验证抗菌药物(如头孢类、喹诺酮类)对非致病大肠杆菌的敏感性测试结果,校准药敏检测设备,为临床用药提供基础参照。


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