生物安全与来源：生物安全等级为 1 级（BSL-1），无致病性，属于人类肠道正常菌群（非致病菌株），常规实验室规范操作（超净台接种、无菌耗材使用）下，对操作人员及环境无危害。该菌株分离自健康人类粪便样本，其生物学特性与自然环境中（如水体、食品）常见的粪源大肠杆菌高度一致，能精准模拟粪源污染指示菌的生理代谢特征，是判断环境与食品是否受粪便污染的核心参照菌株。
形态与培养特性：属于革兰氏阴性短杆菌，归为肠杆菌科，具有典型肠道杆菌形态与高适应性培养特征：
显微镜形态：菌体呈短杆状，直径 0.5-1.0μm，长度 1.0-2.0μm，常单个或成对排列，无芽孢，具有周生鞭毛（具备稳定运动能力，鞭毛染色后可清晰观察），革兰氏染色呈均匀红色（无着色不均，区别于其他革兰氏阴性杆菌）；
培养要求：对营养需求极低，在普通营养琼脂（NA）、胰酪大豆琼脂（TSA）、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂（EMB）及乳糖发酵培养基中均能快速生长；兼性厌氧，最适生长温度 37℃（适配人体肠道环境），可耐受 10-45℃宽温度范围，生长速度快，37℃培养 18-24 小时即可形成明显菌落，且在 44.5℃选择性温度下可发酵乳糖产酸（粪源大肠杆菌特征，区别于非粪源大肠杆菌）；
菌落形态：在 TSA 平板上，形成直径 2-3mm 的菌落，圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、呈乳白色不透明（质地柔软，挑取时易拉丝）；在麦康凯琼脂上，因发酵乳糖产酸，菌落呈鲜艳粉红色（颜色均一，无深浅差异）；在 EMB 琼脂上，菌落呈紫黑色且带有清晰金属光泽（大肠杆菌标志性特征，无模糊或无光泽现象）；在乳糖发酵培养基中，培养 24 小时内可产酸产气（培养基浑浊，倒置小管内气泡体积占 1/3 以上），是粪源污染检测的核心判定依据。
生化与生理特性：生化反应具有 “标准化” 稳定性，是肠道指示菌鉴别的金标准：能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇等多种糖类产酸产气（发酵速度固定，葡萄糖 12 小时内产酸，乳糖 24 小时内产酸）；触酶试验阳性（10 秒内出现明显气泡，区别于链球菌）、氧化酶试验阴性（结果明确，无假阳性）；吲哚试验阳性、甲基红试验阳性、V-P 试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性（IMViC 试验结果严格为 “++--”，无任何批次变异）；不产生硫化氢，不分解尿素，对常用消毒剂（如含氯消毒剂、75% 乙醇）的敏感性稳定（含氯消毒剂 200mg/L 作用 30 秒即可杀灭，可作为消毒效果验证的标准靶菌）。
未开封状态：产品主要以冻干粉（真空密封包装，含 10^7-10^8 CFU / 支活菌，含指示菌专用保护剂） 或标准化甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用，计数误差≤5%） 形式供应：
冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 1 年）建议放入 - 80℃冰箱，严禁反复冻融（反复冻融会使活菌率下降 50% 以上，破坏 44.5℃发酵等粪源特征）；保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 3 年（专用保护剂可维持菌体代谢稳定性，解冻后活菌分布均匀）；
甘油菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温或冷藏放置（室温暴露 30 分钟可导致菌体活力下降 40%），保质期 2 年；解冻时需 37℃水浴快速溶解（1-2 分钟），解冻后轻轻颠倒混匀 3 次（避免菌体沉淀），一次性使用，剩余菌液需灭菌后丢弃，不可再次冷冻。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤培养）需在 2-8℃冷藏保存，建议 7 天内使用完毕（该菌株代谢稳定，冷藏期长于普通菌株）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 2-3 周内传代一次，传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基，避免营养成分差异影响生长速率与生化特性；使用前需通过涂片镜检（确认菌体形态正常、无杂菌）及乳糖发酵试验（验证 44.5℃下产酸产气能力），确保菌株符合粪源指示菌检测要求。
复苏操作：
冻干粉复苏：无菌环境下（超净台内），向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤（TSB）或生理盐水，轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解（避免产生气泡），转移至含 9mL 无菌生理盐水的试管中，混匀后制成 10^-1 稀释液，可根据实验需求进一步梯度稀释（如 10^-3、10^-5 稀释液，用于平板计数）；取适宜稀释度菌液 0.1mL 涂布于 TSA 或 EMB 平板，37℃培养 24 小时，计数菌落数（理论菌落数与稀释度呈严格对应关系）；若需验证粪源特性，可将复苏菌液接种至 44.5℃培养的乳糖发酵培养基，观察 24 小时内产酸产气情况；
甘油菌复苏：从 - 80℃取出后立即 37℃水浴解冻，轻轻颠倒混匀，无需稀释即可直接用于实验（浓度已标定为 10^6 CFU/mL，适配消毒效力测试、无菌验证等场景）。
传代培养：在超净台内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 TSA 平板上分区划线（确保单菌落分离，便于纯化菌株），37℃培养 18-24 小时；待平板形成单菌落后，挑取形态典型（圆形、乳白色、光滑，EMB 平板上带金属光泽）的单菌落，可直接用于实验，或转接至 TSA 斜面培养基，37℃培养 24 小时后，2-8℃冷藏保存；传代次数严格控制在 5 代以内（避免长期传代导致 44.5℃发酵能力等粪源特征丢失），每次传代后需通过 IMViC 试验验证生化特性，确保符合标准。
应用操作：
水质卫生检测：作为核心指示菌株，用于饮用水、地表水、污水中粪大肠菌群计数方法的验证与质控，如通过该菌株绘制标准菌落计数曲线，校准实验室计数操作；同时可用于评估水质处理工艺（如消毒、过滤）的效果，通过检测处理前后该菌株的活菌数，判断水质是否达到卫生标准；
食品安全筛查：用于果蔬、肉制品、乳制品等食品中大肠杆菌污染检测的质控，验证快速检测试剂盒（如胶体金试纸条）、实时荧光 PCR 等检测方法的特异性与灵敏度，通过模拟食品污染实验（将该菌株添加至无菌食品样本中），确保检测结果准确可靠；
消毒产品效力测试：作为标准靶菌，用于评价含氯消毒剂、过氧乙酸、紫外线等消毒方式的杀菌效果，依据国家标准要求，检测消毒前后该菌株的活菌数，计算杀灭率（要求杀灭率≥99.9%），确保消毒产品符合使用标准；
教学与方法标准化：在微生物教学中，用于演示平板计数法、革兰氏染色、生化反应（如 IMViC 试验）等基础操作，其稳定的特性可帮助学习者掌握标准实验技能；同时可用于实验室新检测方法（如快速微生物计数仪）的验证，确保方法的准确性与重复性，推动微生物检测方法标准化。
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