生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具条件致病性，因 BLNAR 耐药机制对常规 β- 内酰胺类药物耐药，易引发难治性呼吸道感染，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床氨苄西林治疗无效的慢性阻塞性肺病患者痰液样本，生物学特性与临床 BLNAR 型 NTHi 分离株高度一致，可模拟特殊耐药感染状态下的定植与药物耐受行为。
形态与培养特性：革兰氏阴性球杆菌，具双因子营养依赖特征：
显微镜形态：菌体呈球杆状（0.3-0.5μm×0.8-1.5μm），单个或短链排列，无芽孢、无鞭毛，革兰氏染色呈均匀淡红色（易脱色，染色时间控制 20-30 秒），无荚膜（区别于荚膜型流感嗜血杆菌）；
培养要求：兼性厌氧，需 5%-10% CO₂环境，最适培养基为巧克力琼脂、含 X/V 因子的选择性琼脂（需同时添加 X 因子：原卟啉 IX、V 因子：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸），最适温度 35-37℃，生长速度中等（24-48 小时形成菌落），普通营养琼脂不生长；
菌落形态：巧克力琼脂上呈圆形、表面光滑湿润、边缘整齐的灰白色半透明菌落（直径 0.5-1mm），质地柔软，挑取时易拉丝，无溶血现象，菌落呈 “水滴状”（无荚膜相关黏稠光泽，区别于 Hia/Hib 菌株）。
生化与耐药特性：生化反应具物种特异性：氧化酶阳性、触酶阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖产酸不产气，不发酵乳糖、蔗糖；核心优势在于BLNAR 特异性耐药表型：无 β- 内酰胺酶产生（区别于 ATCC33533），因青霉素结合蛋白（PBP3）基因突变导致对氨苄西林耐药（MIC 8-16μg/mL），对阿莫西林 / 克拉维酸、左氧氟沙星敏感（阿莫西林 / 克拉维酸 MIC 0.5-2μg/mL），耐药机制与临床常见 BLNAR 菌株一致，是该类耐药菌株 AST 质控的金标准参照。
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^6-10^7 CFU / 支，含 X/V 因子与耐药表型保护剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^5 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存，长期（>6 个月）建议 - 80℃储存，严禁反复冻融（活菌率下降 70% 以上，破坏 BLNAR 耐药与营养依赖特性），保质期 3 年；
甘油菌：直接 - 80℃保存，室温暴露 20 分钟致活力下降 50%，保质期 2 年，解冻后一次性使用。
复苏后状态：复苏菌液（含 X/V 因子巧克力肉汤培养）2-8℃冷藏 5 天内使用；斜面培养物（含 X/V 因子巧克力琼脂斜面）2-8℃冷藏 2 周内传代，传代需 5% CO₂环境，使用前需镜检确认菌体形态，并通过 β- 内酰胺酶检测（阴性）与氨苄西林药敏预实验（耐药）验证耐药特性。
复苏操作：生物安全柜内，冻干粉加 1mL 含 X/V 因子巧克力肉汤溶解，37℃ 5% CO₂培养 24-48 小时；待菌液浑浊、镜检见典型球杆菌，且巧克力琼脂形成 “水滴状” 菌落时，经 β- 内酰胺酶试纸检测阴性后使用。
传代培养：挑取巧克力琼脂单菌落，划线接种新鲜平板，37℃ 5% CO₂培养 24-48 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤3 代（避免 PBP3 基因突变位点丢失），每次传代后需氨苄西林药敏测试与 β- 内酰胺酶检测验证 BLNAR 表型。
应用操作：
耐药质控：验证呼吸道样本鉴定系统（质谱、生化试剂盒）对 BLNAR 型 NTHi 的检出准确性，避免漏检特殊耐药菌株；
AST 测试：校准氨苄西林、阿莫西林 / 克拉维酸等药物 MIC 值，指导 BLNAR 感染用药（如优先选择 β- 内酰胺酶抑制剂复方制剂）；
耐药研究：用于 PBP3 基因突变功能分析、抗 BLNAR 药物筛选（如新型青霉素结合蛋白抑制剂）；
试剂验证：验证流感嗜血杆菌 BLNAR 检测试剂（如 PBP3 基因 PCR 试剂盒）的敏感性与特异性。
客服1