ATCC 700324 产酸克雷伯菌（Klebsiella oxytoca）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具肠道耐药感染倾向性，主要定植于医院住院患者肠道（尤其长期使用广谱抗生素者），可通过粪 - 口途径传播，在肠道黏膜屏障受损时引发抗生素相关性出血性肠炎（发病率约占医院肠道感染的 15%-20%），严重时可继发败血症，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床抗生素相关性出血性肠炎患者粪便样本，生物学特性与医院获得性肠道来源产酸克雷伯菌分离株高度一致，其耐受肠道低 pH 环境、分泌肠毒素（如 Cytotoxic necrotizing factor 1, CNF1）及产耐药酶的能力显著，可模拟 “肠道定植 - 抗生素诱导 - 毒素分泌 - 肠道损伤” 的典型感染过程，是研究产酸克雷伯菌肠道耐药感染机制的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具肠道耐药菌株特有的形态适应性与培养筛选适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.5-1.0μm×1.2-2.2μm），大小略小于医院获得性肺炎克雷伯菌，单个或短链排列（呈 “双球状” 聚集的比例约 20%-30%，适配肠道菌群分散定植特征），无芽孢，周生鞭毛明显（动力试验阳性，区别于无鞭毛的肺炎克雷伯菌，核心鉴别点之一），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，30-60 秒内不易脱色，适配粪便样本等复杂肠道样本染色操作），荚膜染色可见薄荚膜（荚膜厚度约 0.3-0.6μm，薄于肺炎克雷伯菌，荚膜多糖含肠道黏附相关修饰，是增强肠道定植能力的关键结构）；
培养要求：兼性厌氧，耐受肠道低氧与宽 pH 环境（在 pH 5.0-8.5 范围内均可生长，适配肠道 pH 波动特征），最适培养基为麦康凯琼脂（含碳青霉烯类药物筛选，如亚胺培南 4μg/mL）、SS 琼脂（肠道菌选择性培养基）及营养肉汤（添加 0.1% 胆汁盐模拟肠道环境），最适温度 35-37℃（温度波动 ±1.5℃时，生长速率变化≤10%，适配医院实验室培养条件差异），生长速度较快（18-24 小时形成清晰菌落，适配肠道感染快速检测需求），核心特征为肠道耐药筛选适应性（在含亚胺培南的麦康凯琼脂上 100% 生长，普通敏感株完全抑制，同时在 SS 琼脂上形成红色菌落，可快速从粪便样本中分离耐药菌株）；
菌落形态：麦康凯琼脂上呈圆形、表面光滑略干燥、边缘整齐的红色菌落（直径 1.0-1.6mm），质地较硬（因耐药酶与生物膜基质分泌，较普通产酸克雷伯菌更难挑取），挑取时拉丝长度短（约 1.0-2.0cm，短于普通产酸克雷伯菌，是耐药株与敏感株的肉眼鉴别点之一），菌落表面具弱光泽（因肠道适配外膜蛋白表达）；SS 琼脂上呈红色、中心略深的菌落，无溶血现象（接种绵羊血琼脂无溶血环，区别于肠道常见的溶血性链球菌）；菌落易与其他肠道耐药肠杆菌科菌株（如大肠埃希菌）混淆，需通过动力试验、生化反应及耐药谱进一步确认属性。
生化与药敏特性：生化反应具肠道耐药株特有标识，药敏谱符合医院获得性肠道产酸克雷伯菌感染治疗需求：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 12-25 秒，无延迟反应），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖产酸产气（发酵麦芽糖能力强于普通产酸克雷伯菌，是肠道耐药株与非肠道株的核心生化鉴别点），发酵山梨醇阳性（48 小时内菌落周围出现明显红色晕圈，区别于普通产酸克雷伯菌的山梨醇阴性或弱阳性，符合肠道菌株生化特征），VP 试验阳性（反应强度弱于肺炎克雷伯菌），甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 95% 阳性，偶见延迟阳性，适配肠道菌株生化变异特征），生化结果符合医院获得性肠道产酸克雷伯菌特征，可作为肠道耐药菌生化鉴定卡性能验证的关键菌株；
药敏特性：核心优势在于肠道耐药株适配药敏谱，携带 KPC-3 碳青霉烯酶基因（区别于产 ESBLs 的 ATCC49131），对青霉素类（氨苄西林）、头孢菌素类（头孢噻肟、头孢他啶）、碳青霉烯类（亚胺培南、美罗培南）均耐药（亚胺培南 MIC 8-16μg/mL，美罗培南 MIC 8-16μg/mL），对氟喹诺酮类（左氧氟沙星）中度耐药（MIC 8-16μg/mL），仅对多黏菌素类（黏菌素）、替加环素及新型 β- 内酰胺酶抑制剂复方制剂（头孢他啶 / 阿维巴坦）敏感（黏菌素 MIC 0.5-2μg/mL），药敏谱与临床肠道耐药产酸克雷伯菌感染治疗困境高度匹配，同时其肠毒素（CNF1）表达稳定，是研究 “耐药 - 产毒” 协同致病机制的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加肠道菌株保护剂、耐药基因稳定剂与毒素蛋白保护剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 1.5 年，短于普通敏感株），长期（>1.5 年）必须置于 - 80℃±5℃储存（KPC-3 基因与肠毒素基因对温度敏感，低温可避免表型漂移），严禁反复冻融（冻融次数≥2 次时，活菌率下降≥60%，且 KPC-3 酶活性降低 40%、肠毒素分泌量下降），保质期 4 年（因肠道耐药株表型稳定性略低于非肠道耐药株，保质期短于 ATCC700603）；
甘油菌：直接 - 80℃±5℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致菌体破裂与耐药 - 产毒双表型退化），室温暴露 15 分钟致活力下降 45%（暴露耐受性低于普通产酸克雷伯菌），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止耐药基因与毒素基因交叉污染实验环境，尤其避免与肠道敏感株实验区域混用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，添加 0.1% 胆汁盐与 1μg/mL 亚胺培南诱导耐药 - 产毒双表型表达）2-8℃冷藏 5 天内使用（5 天内 KPC-3 酶活性、肠毒素分泌量及药敏 MIC 值波动≤10%，超过则需重新复苏）；斜面培养物（营养琼脂斜面，含 0.1% 胆汁盐与 2μg/mL 亚胺培南）2-8℃冷藏 3 周内传代（传代间隔≥6 天时，双表型稳定性最佳），传代时需避免反复划线（防止菌株纯度下降导致的药敏与产毒结果偏差），使用前需通过四项关键指标验证：①镜检确认短杆状形态（变异系数≤10%）；②山梨醇发酵试验（阳性）；③亚胺培南药敏 MIC 值（8-16μg/mL）；④CNF1 肠毒素检测（ELISA 阳性），确保表型未漂移，符合肠道耐药产酸克雷伯菌要求。
四、使用方法
复苏操作：生物安全柜内，冻干粉加 1mL 含胆汁盐与亚胺培南的营养肉汤溶解，37℃恒温培养箱振荡培养（150rpm）18-24 小时；待菌液浑浊（OD600≈0.8）、镜检见典型短杆菌，且接种含亚胺培南的麦康凯琼脂形成红色菌落、SS 琼脂形成红色菌落时，通过 KPC-3 基因 PCR 与 CNF1 肠毒素检测确认双表型后使用（复苏过程中添加胆汁盐可维持肠道株特性，复苏成功率≥95%）。
传代培养：挑取含药麦康凯琼脂上的红色单菌落（选择形态典型、无变异的菌落），划线接种新鲜含药麦康凯琼脂平板（或 SS 琼脂平板），37℃培养 18-24 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤4 代（传代次数≥5 代时，KPC-3 酶活性与肠毒素分泌量降至初始水平的 70% 以下，不符合双表型要求），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 耐药 - 产毒” 四重验证：①革兰氏染色确认染色稳定性；②山梨醇发酵试验与 VP 试验确认生化一致性；③亚胺培南与黏菌素药敏确认耐药谱稳定性；④CNF1 肠毒素检测确认产毒特性，确保菌株始终符合肠道耐药产酸克雷伯菌属性。
应用操作：
肠道耐药感染质控：用于医院检验科肠道感染样本（粪便、直肠拭子）、腹腔感染样本（腹腔积液）鉴定系统（质谱耐药数据库、KPC 基因 PCR 试剂盒、肠毒素检测试剂盒）的性能验证，确保肠道耐药产酸克雷伯菌不被漏检或误判为其他肠道耐药菌，尤其适配抗生素相关性出血性肠炎的精准诊断；
抗肠道耐药菌 AST 校准：校准针对肠道耐药产酸克雷伯菌的 AST 试剂（如多黏菌素类、替加环素药敏纸片）的 MIC 值，制定肠道耐药感染用药方案（如抗生素相关性出血性肠炎治疗优先选择黏菌素联合肠道黏膜保护剂，避免使用碳青霉烯类药物加重耐药）；
肠道致病机制研究：用于产酸克雷伯菌肠道定植机制（如与肠道益生菌的竞争作用、肠道上皮细胞黏附实验）、KPC-3 耐药基因水平传播机制（如质粒转移实验）及 “耐药 - 产毒” 协同致病机制（如肠毒素对肠道屏障的破坏作用）研究，为肠道耐药感染防控提供理论依据；
医院感染培训：作为医院肠道感染防控培训菌株，用于医务人员 “肠道耐药菌粪 - 口传播阻断”（如手卫生、环境消毒效果验证）、“抗生素合理使用与肠道菌群保护” 等实操培训，及 “肠道耐药株与非肠道耐药株表型差异” 对比教学，提升医院肠道耐药感染防控意识。
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