ATCC 31488 水痘克雷伯氏菌（Klebsiella variicola WDCM 00206）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具环境适应性与临床条件致病性双重属性，广泛存在于自然环境（土壤、植物根际、水体），尤其在豆科植物根瘤中可与宿主形成共生关系（固氮能力弱于根瘤菌，但具协同促生作用）；在临床场景中，主要引发免疫缺陷人群（如肿瘤患者、长期使用激素者）的泌尿道感染、肺部感染及血流感染，病死率低于肺炎克雷伯菌，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自土壤样本（豆科植物根际），生物学特性经 WDCM 认证，既保留环境菌株的代谢多样性，又具备临床相关菌株的致病潜力，可模拟 “环境定植 - 人体暴露 - 条件感染” 的典型过程，是研究克雷伯菌属环境 - 临床跨界传播机制的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具水痘克雷伯氏菌特有的形态稳定性与环境 - 临床双场景培养适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.5-1.0μm×1.4-2.3μm），大小略小于肺炎克雷伯菌（如 ATCC10031），单个或成对排列（呈 “双球状” 聚集的比例约 20%-30%，低于肺炎克雷伯菌，适配环境中分散存活特征），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，与肺炎克雷伯菌一致），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，30-60 秒内不易脱色，适配土壤样本杂质干扰与临床样本黏液覆盖的染色操作），荚膜染色可见薄至中等厚度荚膜（荚膜厚度约 0.4-0.8μm，薄于肺炎克雷伯菌，荚膜多糖含环境应激相关修饰，增强抗干旱、抗紫外线能力，是区别于肺炎克雷伯菌的结构特征）；
培养要求：兼性厌氧，对环境适应性强（在 pH 4.5-9.0、温度 15-40℃范围内均可生长，适配土壤酸碱度波动与昼夜温差），最适培养基为营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂（EMB）及植物根际模拟培养基（添加 0.1% 豆科植物提取物），最适温度 30-37℃（30℃时固氮相关基因表达活跃，37℃时致病相关基因表达增强，适配双场景研究需求），生长速度中等（18-24 小时形成清晰菌落，环境样本培养需延长至 36 小时），核心特征为双场景培养普适性（在普通营养培养基与植物根际模拟培养基上均能良好生长，且菌落形态差异小，区别于仅适应临床环境的肺炎克雷伯菌）；
菌落形态：营养琼脂上呈圆形、表面光滑湿润、边缘整齐的乳白色菌落（直径 1.0-1.6mm），质地柔软，挑取时拉丝长度短（约 1.0-2.0cm，显著短于肺炎克雷伯菌的 2.5-4.5cm，是肉眼鉴别关键特征），菌落表面具弱光泽（因环境适应相关外膜蛋白覆盖）；麦康凯琼脂上呈粉红色菌落，无扩散现象，产酸强度弱于肺炎克雷伯菌（菌落颜色略浅）；EMB 琼脂上呈紫黑色、中心无明显金属光泽的菌落（区别于肺炎克雷伯菌的强金属光泽）；植物根际模拟培养基上菌落略大（直径 1.2-1.8mm），表面出现细微褶皱（固氮相关代谢产物积累所致）；菌落易与肺炎克雷伯菌混淆，需通过拉丝长度、培养基适应性及生化反应进一步确认分类属性。
生化与药敏特性：生化反应具水痘克雷伯氏菌特有标识，药敏谱符合环境 - 临床双场景需求：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 12-22 秒，与肺炎克雷伯菌相近），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸产气（不发酵 D - 阿拉伯糖，核心鉴别点之一，肺炎克雷伯菌多数发酵 D - 阿拉伯糖），发酵蜜二糖阳性（48 小时内菌落周围出现红色晕圈，肺炎克雷伯菌多为阴性，是分类学关键生化特征），VP 试验阳性（反应强度弱于肺炎克雷伯菌），甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 100% 阳性，无延迟），吲哚试验阴性（区别于部分吲哚阳性的克雷伯菌属菌株）；生化反应结果完全符合《伯杰细菌鉴定手册》中水痘克雷伯氏菌的描述，可作为克雷伯菌属近缘种精细鉴别的 “金标准菌株”，尤其适合环境微生物实验室与临床实验室的分类学验证；
药敏特性：核心优势在于双场景适配药敏谱，无多重耐药基因携带（区别于医院获得性肺炎克雷伯菌耐药株），仅对青霉素类药物（氨苄西林、青霉素 G）天然耐药（氨苄西林 MIC≥32μg/mL，耐药浓度与肺炎克雷伯菌相近），对临床常用抗菌药物（头孢曲松、左氧氟沙星、庆大霉素、阿莫西林 / 克拉维酸）均敏感（头孢曲松 MIC 0.12-0.5μg/mL，左氧氟沙星 MIC 0.25-1μg/mL），对环境中常见抑菌物质（如植物源黄酮类、土壤重金属离子）耐受性高于肺炎克雷伯菌（对 10μg/mL 铜离子仍可生长，肺炎克雷伯菌完全抑制）；药敏谱既适配临床条件感染的治疗需求，又满足环境微生物耐药监测的基线建立，同时其固氮相关基因（nifH）与致病相关基因（fimH）表达可通过温度调控，是研究克雷伯菌属功能基因适应性进化的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，符合 WDCM 认证标准，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加荚膜保护剂、固氮基因稳定剂与环境应激保护剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 2.5 年，因环境适应基因稳定性高，保质期长于肺炎克雷伯菌临床株），长期（>2.5 年）建议置于 - 80℃±5℃储存（低温可同时维持固氮基因与致病基因的稳定性，避免分类学特征漂移），严禁反复冻融（冻融次数≥3 次时，活菌率下降≥50%，但生化特性与药敏谱仍稳定，区别于冻融后易失活的耐药株），保质期 5 年（经 WDCM 认证的保质期，是克雷伯菌属中环境 - 临床双用菌株的标杆）；
甘油菌：直接 - 80℃±5℃保存（可在 - 20℃短期存放≤2 个月，活力下降≤12%，适配环境微生物实验室短期使用需求），室温暴露 25 分钟致活力下降 35%（暴露耐受性高于肺炎克雷伯菌，因环境菌株抗逆性强），保质期 3 年，解冻后可分装为 100-200μL / 支用于双场景实验（无耐药基因交叉污染风险，适合环境与临床实验室共用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，环境研究需添加 0.1% 豆科植物提取物，临床研究无需添加）2-8℃冷藏 7 天内使用（7 天内生化反应、药敏 MIC 值及固氮活性波动≤10%，双场景特性均稳定）；斜面培养物（营养琼脂斜面，环境研究可添加植物提取物）2-8℃冷藏 4 周内传代（传代间隔≥7 天时，双场景表型稳定性最佳），传代无需特殊环境控制，使用前需通过四项关键指标验证：①镜检确认菌体大小均一性（变异系数≤8%）；②D - 阿拉伯糖发酵试验（阴性）与蜜二糖发酵试验（阳性）；③头孢曲松药敏 MIC 值（0.12-0.5μg/mL）；④30℃条件下固氮活性检测（乙炔还原法阳性），确保表型未漂移，符合 WDCM 00206 标准属性。
四、使用方法
复苏操作：根据研究场景选择复苏方案，生物安全柜内，冻干粉加 1mL 对应培养基（环境研究用含植物提取物的营养肉汤，临床研究用普通营养肉汤）溶解，环境研究置于 30℃恒温培养箱振荡培养（120rpm）24 小时，临床研究置于 37℃恒温培养箱静态培养 18-24 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.7-0.8（吸光度变异系数≤4%）、镜检见短杆状菌体，且接种对应培养基形成典型菌落时，通过 D - 阿拉伯糖与蜜二糖发酵试验确认分类属性后使用（复苏成功率≥98%，双场景操作流程清晰，适配不同实验室需求）。
传代培养：环境研究挑取植物根际模拟培养基上的菌落，临床研究挑取麦康凯琼脂上的菌落，分别划线接种对应新鲜培养基，环境研究 30℃培养 24 小时，临床研究 37℃培养 18-24 小时；斜面保存时，环境研究用含植物提取物的营养琼脂斜面，临床研究用普通营养琼脂斜面，培养后置于 2-8℃冷藏；传代≤6 代（传代次数≥7 代时，仅固氮活性略有下降，生化与药敏特性仍稳定），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 功能” 三重验证：①革兰氏染色确认形态稳定性；②核心生化试验确认分类一致性；③场景专属功能检测（环境场景测固氮活性，临床场景测黏附上皮细胞能力），确保菌株始终符合水痘克雷伯氏菌分类属性。
应用操作：
分类学研究与鉴别：用于克雷伯菌属近缘种（水痘克雷伯氏菌与肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌）的分类学研究，通过全基因组测序比对、核心生化特征分析建立精准分类方法；同时作为临床实验室鉴别对照菌株，用于区分临床样本中水痘克雷伯氏菌与肺炎克雷伯菌，避免因形态相似导致的误诊（如泌尿道感染中，水痘克雷伯氏菌对氨苄西林耐药但对其他药物敏感，治疗方案与肺炎克雷伯菌一致，但预后更佳）；
环境微生物研究：用于土壤微生物群落分析、植物根际促生机制研究（如与豆科植物的协同固氮作用、分泌植物生长激素能力），及环境污染物降解研究（如对农药残留、石油烃类的降解潜力评估），为农业生态修复与环境治理提供微生物资源与理论依据；
临床感染质控：用于医院检验科条件感染样本（如肿瘤患者尿液、ICU 患者痰液）鉴定系统（质谱水痘克雷伯氏菌专属数据库、生化鉴定卡）的性能验证，确保临床中水痘克雷伯氏菌感染不被漏检或误归为肺炎克雷伯菌，同时可作为 AST 实验室校准菌株，验证药敏试剂对非肺炎克雷伯氏菌属菌株的检测准确性；
跨领域教学培训：作为微生物学跨领域教学菌株，用于环境微生物学（根际菌群互作）、临床微生物学（条件致病菌鉴别）、分类学（近缘种区分）的实验教学，帮助学员理解微生物 “环境 - 临床” 跨界分布特征与功能适应性，提升跨领域微生物鉴别能力。
客服1