ATCC7644单核细胞增生李斯特菌Listeria monocytogenes

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一、菌种基础信息

中文名称：单核细胞增生李斯特菌

拉丁学名：Listeria monocytogenes

标准编号：ATCC7644

产品形式：冻干粉（含海藻糖 - 脱脂乳 - 谷氨酸复合保护剂，减少冻干过程中菌体活性损失，复苏率≥90%）

安全等级：2 级（强致病性菌株，是人畜共患李斯特菌病的重要病原体，主要通过污染的即食食品、乳制品感染人类，孕妇、老人、免疫缺陷人群感染后致死风险高，需在生物安全二级实验室（BSL-2）严格遵循操作规范）

模式菌株：非模式菌株（为单核细胞增生李斯特菌血清型 4b 的代表性菌株，是食品安全检测、临床质控及致病性研究领域的常用参照菌株）

分类地位：隶属于李斯特菌科、李斯特菌属，是李斯特菌属中对人类致病性最强的菌种之一，广泛存在于食品加工环境（如冷链车间、屠宰场）、土壤、水体及生肉、乳制品中，是全球食品安全监管的重点致病菌。

二、核心生物学特性

形态特征：菌落呈灰白色，直径 1-2.5mm，表面光滑湿润、边缘整齐，质地黏稠且半透明，在李斯特菌选择性培养基上表现典型：PALCAM 培养基上形成黑色菌落，周围环绕透明 halo 环；Oxford 培养基上呈灰色菌落，中心为黑色；在血琼脂平板上形成狭窄的 β- 溶血环（与非致病李斯特菌的无溶血环、伊万诺夫李斯特菌的宽大溶血环明确区分）；菌体为革兰氏阳性短杆菌，大小约 0.5-0.8μm×1.0-2.2μm，常单个、成对或短链排列，无芽孢，有周生鞭毛（20-25℃时运动活跃，呈 “翻筋斗” 样，37℃时运动能力显著减弱），革兰氏染色后形态清晰可辨。

生理特性：兼性厌氧菌，生长温度范围极宽（-0.4-45℃，低温适应性极强，0-4℃冷藏环境下仍可快速繁殖，是即食食品冷藏储存的关键安全隐患），最适生长温度 30-37℃，生长 pH 范围 4.4-9.5，耐盐性强（可在含 10% NaCl 的培养基中正常生长）；能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、鼠李糖产酸不产气，不发酵木糖、甘露醇，甲基红试验阳性，V-P 试验阳性，不产吲哚，不分解尿素，触酶试验阳性；强致病性特征显著，携带完整毒力基因簇（prfA调控系统、溶血素 O 基因hly、内化素基因inlA/inlB、磷脂酶基因plcA/plcB等），可通过 “细胞间传播” 机制穿透肠道屏障、胎盘屏障，引发败血症、脑膜炎、新生儿感染及孕妇流产，感染致死率达 20%-35%。

三、培养与保存条件

培养条件：推荐使用李斯特菌选择性培养基（PALCAM 培养基含头孢他啶、多粘菌素 B；Oxford 培养基含吖啶黄、多粘菌素 B）或血琼脂培养基，37℃有氧培养 24-48h（普通培养箱静置即可，通入 5% CO₂可促进菌落特征与溶血环更清晰）；液体培养选用李斯特菌增菌肉汤（LEB）或 Fraser 肉汤，37℃振荡培养（转速 150-200rpm）18-24h，菌体浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL；观察运动性时，建议 22℃培养 24h，运动特征更明显。

活化步骤：需在 BSL-2 实验室生物安全柜内操作，无菌环境下开启安瓿管，用 0.5-1mL 预热至 37℃的无菌 LEB 培养基溶解菌粉，将菌液全部接种至血琼脂平板，37℃培养 24h 后，挑取单个具狭窄 β- 溶血环的菌落，转接至 5mL Fraser 肉汤，37℃振荡培养 16h，获得高活性种子液（操作中严禁菌液飞溅，全程佩戴护目镜，防止气溶胶传播）。

保存方法：未启封冻干粉 2-8℃密封避光保存，有效期 5 年；复苏后斜面菌种 4℃密封保存，每 1 个月继代 1 次，有效期 1 个月（需单独存放，与非致病菌株隔离，张贴警示标识）；长期保存需将对数生长期菌液与 30% 无菌甘油按 1:1 混合，分装后 - 80℃冷冻，或真空冻干后 - 20℃保存，有效期 4-5 年，严禁反复冻融（单次冻融活性损失≥25%）。

四、主要应用领域

食品安全检测与质控：作为食品中单核细胞增生李斯特菌检测的阳性对照菌株，广泛用于验证检测方法（实时荧光定量 PCR、免疫磁珠分离法、酶联免疫吸附法）的准确性与灵敏度，支撑食品企业（如乳制品厂、即食食品厂）及监管机构的日常检测，符合 GB 4789.30-2022《食品安全国家标准 食品微生物学检验 李斯特菌检验》、ISO 11290-1 等标准；同时可用于食品加工环境（车间设备、人员手部、冷链运输）的污染溯源，助力构建食品安全防控体系。

临床诊断与药物研发：作为临床微生物实验室的质控菌株，用于验证李斯特菌病诊断试剂（抗原检测试纸、抗体试剂盒、MALDI-TOF MS 数据库）的可靠性，辅助临床确诊感染病例；用于抗李斯特菌药物（氨苄西林、复方新诺明、喹诺酮类）的体外药敏试验，为临床用药方案制定及新型抗菌药物研发提供实验模型。

致病性研究与教学：作为单核细胞增生李斯特菌血清型 4b 的模型菌株，用于探索毒力基因表达调控、宿主细胞侵袭机制（如肠道上皮细胞穿透、巨噬细胞内存活）及免疫逃逸路径，为疫苗研发（减毒活疫苗、亚单位疫苗）提供靶点；用于高校微生物学、食品安全学教学实验（致病菌分离鉴定、低温生长试验、溶血特性观察），帮助学生掌握高危致病菌的鉴别要点与安全操作规范。

五、质量与安全保障

每批次产品通过五重质量检测：纯度检测（涂布营养琼脂、李斯特菌选择性培养基及血琼脂平板，确保无杂菌污染，菌落与溶血特征典型）、活性检测（平板计数法，活菌数≥10⁸CFU / 支）、特性验证（API Listeria 生化鉴定、16S rRNA 基因测序、血清型 4b 鉴定及毒力基因（hly、inlA、prfA）检测）、稳定性检测（37℃加速试验及 4℃冷藏试验验证活性稳定）、污染控制检测（检测噬菌体、内毒素，排除额外生物危害），随货附带完整 COA（分析报告），质量可追溯。

操作需严格遵循《病原微生物实验室生物安全管理条例》，仅限经专业培训考核合格的人员在 BSL-2 实验室操作，穿戴无菌手套、防护口罩、护目镜及实验服，全程在生物安全柜内处理菌液；实验废弃物（含菌培养基、耗材、防护用品）需 121℃高压蒸汽灭菌 60min 后处理；若发生菌液泄漏，立即用 1000mg/L 含氯消毒剂覆盖污染区域并作用 60 分钟，通风 30 分钟以上，暴露人员需清洗消毒并医学观察 7 天；收货 24 小时内，若发现安瓿管破损、菌粉变色或复苏后无典型致病特征菌落，需在生物安全柜内妥善处理破损品，并按致病性微生物运输规范联系售后退换货。

ATCC7644单核细胞增生李斯特菌Listeria monocytogenes

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