形态:革兰氏阴性短杆菌,显微镜下呈直杆状,两端钝圆,大小约 0.5-0.8μm×1.0-2.0μm,无芽孢,具周生鞭毛(1-5 根),可自主运动(显微镜下呈 “缓慢穿梭样” 运动)。在普通营养琼脂上形成直径 1.0-2.5mm 的淡红色至深红色菌落,质地湿润、表面光滑且具黏性(挑取时可拉成丝,“粘质” 特性),边缘整齐;在麦康凯培养基上呈红色菌落(能发酵乳糖产酸,与沙门氏菌无色菌落区分);在血琼脂培养基上多表现为 γ- 溶血(不溶血),少数菌株呈微弱 α- 溶血;色素生成具温度依赖性,25-30℃培养时色素产量最高,37℃培养时色素合成受抑制(菌落呈乳白色,温度恢复后可重新产色),这一特性是重要鉴别标志。
生理生化:兼性厌氧微生物,最适生长温度 25-30℃(色素合成最优)、35-37℃(临床感染相关研究适配温度),最适 pH 值 6.5-7.5,对营养要求低,在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可快速生长,能耐受低营养环境(如含 0.05% 碳源的培养基)。生化反应中,氧化酶试验阴性(肠杆菌科典型特征),触酶试验阳性,硝酸盐还原试验阳性(可还原为氮气),吲哚试验阴性,甲基红试验阴性,VP 试验阳性(产乙酰甲基甲醇),柠檬酸盐利用试验阳性(能以柠檬酸盐为唯一碳源),尿素酶试验阴性;糖类发酵方面,可发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖(产酸产气),不发酵阿拉伯糖、木糖;毒力特性上,携带群体感应相关基因(luxI/luxR)调控生物膜形成与毒素分泌,具较强生物膜黏附能力(易附着于医疗器械表面),可产生蛋白酶、脂肪酶等胞外酶,对免疫功能低下人群易引发尿路感染、呼吸道感染等条件性感染,是医院环境中常见的机会致病菌。
培养基:常规培养(色素观察)优先选用营养琼脂或 LB 培养基(25-30℃培养 48 小时,色素充分生成);临床感染相关研究选用 TSB 培养基(35-37℃培养,模拟体内环境);药物敏感性试验需采用 MH 培养基(符合 CLSI 标准,确保药敏结果准确);生物膜研究可选用聚苯乙烯培养板(利于生物膜附着)。
操作:固体培养(色素观察)置于 25-30℃恒温培养箱静置 48 小时,可形成深红色黏性菌落;临床相关培养(35-37℃)静置 18-24 小时,菌落呈乳白色;液体培养(色素研究)采用 25-30℃、150rpm 摇床振荡培养 24-36 小时,菌液呈红色浑浊状(色素溶于培养基),菌浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL;生物膜培养需静置培养 48 小时(避免振荡破坏生物膜结构)。传代次数建议控制在 5 代以内,温度波动需≤±1℃,避免因传代过多导致色素合成基因失活或生物膜形成能力减弱。
短期(1-2 周):取 25-30℃培养 48 小时的纯培养菌株(需确认红色色素与黏性特征),接种至营养琼脂斜面培养基,25℃培养 24 小时后,密封管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3 天观察一次菌株状态,若发现菌落干燥、污染或色素褪色,需及时重新接种(优先在 25-30℃复壮),防止菌株失活。
长期(3 年以上):推荐两种高效保存方法:①冷冻干燥保存法:取 25-30℃培养 24 小时的对数生长期菌液(OD600=0.7-0.9,色素生成初期,菌体活性高),与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 蔗糖(保护色素合成相关酶)的复合保护剂按 1:1 体积比混匀,分装至无菌冷冻管(每管 0.5mL),经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后冷冻干燥,干燥后置于 - 80℃冰箱保存,保存期限可达 5-7 年,复苏后色素生成能力保留率≥90%;②甘油冷冻保存法:将对数生长期菌液与无菌甘油(终浓度 20%)混合均匀,分装至无菌冷冻管,直接放入 - 80℃冰箱保存,保存期限 3-5 年,操作简便(复苏时需在 25-30℃培养复壮,恢复色素合成)。长期保存需每 12 个月复苏一次,复苏后通过革兰氏染色、色素生成试验(25-30℃培养)、VP 试验及生物膜形成能力检测,全面验证菌株纯度、生理活性与特色特性,确保后续实验使用效果。


客服1