生理生化：兼性厌氧微生物，最适生长温度 35-37℃（适配人体与反刍动物体温，30-40℃范围内均可生长），最适 pH 值 7.0-7.4，对营养要求中等，在普通营养琼脂上可生长（无需血清辅助，与无乳链球菌的高营养需求区分），但含葡萄糖的培养基中生长更旺盛。生化反应中，触酶试验阴性（链球菌属共性，与葡萄球菌区分），氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，VP 试验阴性（与无乳链球菌的 VP 阳性区分）；关键生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖（均产酸不产气），不发酵甘露醇、阿拉伯糖，胆汁七叶苷试验阳性（可分解七叶苷，与肠球菌的阳性结果一致，但牛链球菌不运动、无芽孢，肠球菌偶有运动性）；毒力特性上，携带肠道黏附相关毒力基因（如黏附素基因 sba、荚膜样物质基因 csa），对人类结肠上皮细胞及牛肠道上皮细胞黏附能力强，人类中主要与结直肠癌相关，偶引发感染性心内膜炎、败血症（无母婴感染风险，与无乳链球菌的母婴感染特性区分），动物中无致病性，仅作为肠道正常菌群存在。
培养基：常规培养优先选用营养琼脂或含 0.5% 葡萄糖的 LB 培养基（35-37℃培养 24-30 小时，促进生长）；临床粪便样本分离推荐使用 D 群链球菌选择性培养基（含叠氮钠，抑制革兰氏阴性菌与葡萄球菌）；反刍动物肠道样本分离可选用含瘤胃液提取物的培养基（模拟肠道环境）；药物敏感性试验需采用 MH 琼脂培养基（无需加血，与无乳链球菌的 MH 血琼脂区分，符合 CLSI 标准）；胆汁七叶苷试验需使用胆汁七叶苷培养基（验证阳性反应）。
操作：固体培养置于 35-37℃恒温培养箱（无需 CO₂环境，与无乳链球菌的 CO₂需求区分）静置 24-30 小时，可形成形态典型的单菌落（血琼脂上重点观察 α- 溶血环与短链排列）；液体培养采用 35-37℃、150-180rpm 摇床振荡培养 20-24 小时（振荡速率高于无乳链球菌，促进短链分散与营养吸收），培养后期菌液呈均匀浑浊状（浊度高于无乳链球菌），菌浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL，且能最大程度保留肠道黏附能力。传代次数建议控制在 5 代以内，温度波动需≤±1℃，避免因传代过多导致 α- 溶血活性减弱或发酵特性改变。
短期（1-2 周）：取 35-37℃培养 24 小时的纯培养菌株（需确认 α- 溶血、D 群抗原阳性、胆汁七叶苷阳性），接种至含 0.5% 葡萄糖的营养琼脂斜面培养基，35℃培养 16 小时后，密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3-4 天观察一次菌株状态，若发现菌落干燥、污染、溶血环变浅，需及时重新接种（35-37℃复壮），防止菌株失活。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.8-1.0，培养 20 小时，含葡萄糖培养基），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物 + 0.2% 葡萄糖（保护发酵酶活性）的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 3 小时、-80℃冷冻 6 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-8 年，复苏后 α- 溶血活性与胆汁七叶苷阳性率≥95%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 20%，与无乳链球菌的 25% 区分）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-5 年，操作简便（复苏时需接种至血琼脂与胆汁七叶苷双培养基，同时验证核心特性）。长期保存需每 12 个月复苏一次，复苏后通过革兰氏染色（确认短链排列）、溶血试验、D 群抗原检测、胆汁七叶苷试验及肠道细胞黏附试验，全面确认菌株纯度、生理活性与肠道定植特性，确保后续实验使用效果。
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