形态与生化:菌体呈短杆状或球杆状,大小(0.5-1.0)μm×(1.0-2.2)μm,两端钝圆,无芽孢,无鞭毛(无运动性,与大肠埃希氏菌等有鞭毛肠道菌形成明确鉴别),多数菌株具厚实荚膜(经荚膜染色后呈明显黏液状,菌落拉丝现象显著,是其典型形态特征)。最适生长温度 35-37℃,兼性厌氧(有氧环境生长更旺盛,菌落形成速度快;无氧时可通过发酵葡萄糖产酸供能,生长速度略缓),适宜 pH 6.8-7.6;生化特征具属种特异性且高度稳定:发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖均产酸产气,氧化酶阴性,触酶阳性,硝酸盐还原试验阳性,吲哚试验阴性(与同属产酸克雷伯菌 “吲哚试验阳性” 的核心差异点,是两者精准鉴别的关键标志),VP 试验阳性,可利用柠檬酸盐作为唯一碳源,不产生硫化氢,不水解尿素,这些稳定的生化反应不仅是肺炎克雷伯菌鉴定的 “金标准”,也是其与肠杆菌科其他菌种区分的重要依据。
致病性相关:属于条件致病菌,广泛存在于土壤、水、植物及人类肠道、呼吸道黏膜,是人体正常菌群的重要组成部分;当机体免疫功能低下(如老年人、慢性肺部疾病患者、重症监护患者、长期使用免疫抑制剂人群)时,可突破黏膜屏障引发感染,临床常见于呼吸道感染(如医院获得性肺炎、支气管炎)、尿路感染(如肾盂肾炎、膀胱炎),还可导致败血症、肝脓肿、腹腔感染等全身性侵袭性疾病,部分高毒力菌株(如荚膜 K1/K2 型)易引发重症感染,致死率较高。ATCC 13883 为非高毒力菌株,无显著耐药基因,毒力特性明确且稳定,主要用于与临床致病肺炎克雷伯菌(如产碳青霉烯酶耐药株)的致病性对比研究,及各类检测实验的阳性对照株。
培养:无需特殊气体环境,常规有氧培养即可满足需求。推荐培养基包括:营养琼脂(NA,用于菌株活化与纯培养,菌落呈乳白色、黏液状,表面光滑湿润,直径 2.0-3.5mm,挑取时拉丝长度可达 1-2cm,具典型肺炎克雷伯菌菌落特征,便于快速识别)、麦康凯琼脂(MAC,因发酵乳糖,菌落呈粉红色黏液状,直径 1.5-2.5mm,边缘整齐,可快速区分于非发酵乳糖的肠道致病菌,如沙门氏菌、志贺氏菌)、伊红美蓝琼脂(EMB,菌落呈紫黑色,中心具微弱金属光泽或无光泽,黏液状质地突出,进一步确认菌种特性)、TSB 肉汤(用于增菌培养,37℃振荡培养 18-24 小时后,菌液呈中度至重度浑浊,因荚膜多糖成分导致黏稠度较高,活菌数可达 10^8-10^9 CFU/mL,满足后续实验对菌量的需求)。37℃培养 16-24 小时后,各类培养基上均形成典型黏液状菌落,其中 “拉丝试验阳性” 是快速确认该菌株的直观特征,可初步排除非克雷伯菌属菌株。
保存:短期保存(1-4 周):将活化后的纯菌株接种至营养琼脂斜面,37℃培养 12-16 小时后,立即密封斜面管口(防止培养基水分流失导致菌落脱水萎缩,同时避免外界杂菌污染),置于 4℃冰箱冷藏,期间每 2 周观察 1 次菌株生长状态,若出现菌落变色、污染或斜面长霉,需立即重新复苏纯化;长期保存(1 年以上):采用 - 80℃甘油冷冻保存(20% 无菌甘油与对数期菌液按 1:1 体积混合,菌液需取自新鲜 TSB 肉汤,分装至无菌冻存管,避免反复冻融 —— 反复冻融会破坏荚膜结构与菌株生化特性,导致耐药性或致病性改变),或冻干保存(以 10% 脱脂乳为保护剂,冻干过程维持低温干燥环境,冻干后置于 - 20℃以下干燥环境,可保存 3 年以上)。复苏时,将冻存菌液或冻干菌粉接入 TSB 肉汤,37℃振荡培养 8-10 小时(转速 180-200rpm),待菌液 OD600 值达 0.6-0.8(对数生长期,活性最佳)后,转接营养琼脂或麦康凯琼脂纯化,复苏后需通过生化反应(如吲哚试验阴性、乳糖发酵产气)与拉丝试验验证,确保菌株特性未发生改变,必要时可通过 16S rRNA 测序进一步确认菌种身份。
应用:在临床检测领域,作为肺炎克雷伯菌感染诊断的质控株,用于验证麦康凯琼脂、EMB 等选择性培养基的促生长能力与选择性,校准 AST 实验(纸片扩散法、肉汤稀释法、自动化药敏仪)中头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类等抗菌药物的抑菌圈直径或最低抑菌浓度(MIC),确保临床感染诊断与药敏结果的准确性,同时帮助实验室区分肺炎克雷伯菌与产酸克雷伯菌,避免误诊;在食品工业领域,作为食品(如肉制品、乳制品、饮用水)卫生检测的参考株,用于验证食品中 “总大肠菌群”“肠杆菌科细菌” 检测方法的有效性,评估检测流程的可靠性,保障食品卫生安全;在科研领域,用于肺炎克雷伯菌致病机制研究(如荚膜的抗吞噬作用、生物膜形成机制、毒力基因表达调控),及新型抗菌药物(针对克雷伯菌属)的体外活性评价,为耐药菌治疗药物研发提供参考,同时可用于肠道菌群互作机制分析(如与益生菌的拮抗或协同作用);在工业领域,作为微生物检测试剂(如生化鉴定试剂盒、快速核酸检测试纸条)生产企业的出厂质控株,验证试剂性能稳定性与准确性,确保产品质量;在教学领域,用于微生物学实验,演示 “革兰氏阴性杆菌形态观察”“荚膜染色技术”“生化反应鉴别(如吲哚试验、VP 试验)” 及 “拉丝试验”,帮助学习者掌握肠杆菌科克雷伯菌属的核心特性与鉴别方法,建立微生物分类鉴定的基础认知。
安全:需在生物安全二级(BSL-2)实验室操作(因可引发全身侵袭性感染,且临床分离株易产生多重耐药性,存在交叉感染风险);涉及菌液移液、离心、平板涂布等可能产生气溶胶的操作时,必须在生物安全柜内进行,操作人员需佩戴无菌手套、一次性口罩、护目镜,必要时穿防护服,避免皮肤直接接触菌液或吸入含菌气溶胶(黏液状菌液易形成飞沫,增加传播风险);实验结束后,所有污染耗材(培养皿、移液器吸头、离心管、接种环、药敏纸片)需经 121℃高压灭菌 30 分钟以上(确保彻底杀灭菌株,防止环境污染与耐药基因扩散),实验台面用含氯消毒剂(有效氯 1000mg/L)擦拭消毒,作用 30 分钟后再用 75% 乙醇二次消毒;菌株储存需单独存放于专用 BSL-2 实验室冰箱,冻存管外清晰标注 “ATCC 13883 肺炎克雷伯菌(WDCM 00097,非耐药株)- 吲哚试验阴性”、保存日期及操作人员信息,严禁与耐药肺炎克雷伯菌(如产 KPC 酶、NDM 酶菌株)或其他致病性肠杆菌(如致病性大肠杆菌)混合存放,防止交叉污染导致实验结果偏差或耐药基因扩散,同时建立菌株使用与储存台账,确保可追溯。


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