SS 琼脂上：菌落呈无色半透明、圆形光滑，中心因产硫化氢形成黑色沉淀（特征性表现，与铜绿假单胞菌灰绿色产色素菌落鉴别）；
麦康凯琼脂上：因不发酵乳糖，菌落呈无色透明（与铜绿假单胞菌不发酵乳糖但产色素的特性差异显著）；
液体培养（缓冲蛋白胨水 BPW、亚硒酸盐胱氨酸增菌液 SC）：BPW 中呈均匀浑浊（前增菌阶段），SC 中浑浊且液面有轻微菌膜（无色素，与铜绿假单胞菌蓝绿色液体培养物鉴别）。
前增菌：取冻干菌粉，加入 5mL 无菌 BPW，37℃静态培养 8 小时（唤醒休眠菌体，避免直接接种选择性培养基导致菌体损伤）；
增菌与纯化：取 1mL 前增菌液转接至 10mL SC 增菌液，37℃培养 18 小时，取 0.1mL 涂布 SS 琼脂平板，37℃培养 24 小时，挑取无色透明、中心黑沉的单菌落；
扩繁：将单菌落接种至胰酪大豆胨肉汤（TSB），37℃培养 20 小时，制得浓度 10⁸-10⁹ CFU/mL 的菌悬液（可通过麦氏比浊法校准）。
浓度校准：采用涂布计数法，取菌悬液 10 倍梯度稀释至 10⁻⁷、10⁻⁸，取 0.1mL 涂布 SS 琼脂平板（3 个平行），37℃培养 24 小时计数，误差需控制在 ±0.2 log 内；
鉴别特征：
形态：革兰氏染色呈阴性短杆状（直径 0.6-1.0μm，长度 2.0-3.0μm），无鞭毛（与铜绿假单胞菌单端鞭毛、具运动性鉴别）；
生化：氧化酶阴性（与铜绿假单胞菌氧化酶阳性鉴别）、发酵葡萄糖产酸产气、不发酵乳糖、硫化氢试验阳性（滴加醋酸铅试纸变黑），血清凝集试验显 O 4,5,12：H i：1,2 阳性（鼠伤寒血清型特异性鉴别）。
个人防护：穿全包裹式防护服、戴 N95 口罩（防止菌雾吸入）及护目镜，操作后用 75% 乙醇消毒手部，若接触含菌食品模拟样本，需额外用肥皂流水洗手；
环境消毒：实验后用 0.5% 过氧乙酸喷雾消毒生物安全柜，作用 30 分钟后擦拭，紫外灯照射 60 分钟（因菌体易附着表面，延长消毒时间）；地面、操作台每周用 0.3% 含氯消毒剂擦拭；
废弃物处理：含菌培养物、增菌液需 121℃高压灭菌 30 分钟（与 ATCC27853 一致，需彻底灭活致病因子）；食品模拟样本（如污染肉类匀浆）需先加入 20% 次氯酸钠溶液浸泡 60 分钟，再灭菌处理；耗材按医疗有害废弃物分类。
长期存储（推荐）：
冻干法：将对数期菌悬液与 15% 脱脂乳 + 5% 蔗糖保护剂 1:1 混合，冻干后密封，4℃冷藏存放，保质期 4-5 年，存活率≥90%（血清型稳定性优于普通存储方式）；
-80℃冷冻法：菌悬液与 40% 无菌甘油按 2:1 混合（甘油终浓度 13.3%，避免高浓度甘油损伤菌体），分装冻存管快速冻存，保质期 3-4 年（反复冻融不超过 2 次，否则影响血清型表达）；
短期存储（1 个月内）：将菌液接种至 TSB 斜面，37℃培养 24 小时后，4℃冷藏存放，每 10 天传代 1 次，防止菌株退化；
存储管理：单独存放于双锁生物安全冰箱的致病菌区域，与 ATCC27853 等致病菌分区（避免交叉污染影响血清学鉴别）；标签注明 “肠沙门氏菌（ATCC14028，鼠伤寒血清型）”“BSL-2 级”“存储日期”，实行双人双锁领用制度，领用记录需注明 “食品检测” 或 “药敏试验” 用途，严防泄漏引发食物中毒模拟事故。
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