一、基本原则：放置在最难灭菌的位置
原理依据
高压蒸汽灭菌是依靠高温饱和蒸汽来杀灭微生物。在灭菌过程中，蒸汽需要穿透物品到达各个部位才能实现有效灭菌。而物品的不同部位对蒸汽的穿透阻力不同，最难灭菌的位置往往是蒸汽最难到达或者到达时间最晚的地方。将生物指示剂放置在这些位置，可以最真实地反映整个灭菌过程是否成功。
实际操作中的体现
例如在灭菌包装好的医疗耗材时，应将生物指示剂放在包装的中心位置。因为蒸汽需要先穿透外层包装，然后才能到达中心部位，中心位置的物品是最后被蒸汽接触的部分。如果中心位置的生物指示剂显示灭菌成功，那么可以合理推断整个包装内的物品都已被有效灭菌。
二、不同物品的具体放置位置
（一）医疗器械
简单器械（如镊子、剪刀等）
单个器械：对于单独的简单器械，应将生物指示剂放置在器械的关节、缝隙处。因为这些部位容易藏污纳垢，蒸汽较难完全渗透。例如，镊子的关节部位在闭合时会形成一个相对封闭的小空间，蒸汽很难快速进入，将生物指示剂放在此处能够很好地监测蒸汽对这个关键部位的灭菌效果。
器械包：如果是将多个简单器械打包进行灭菌，要把生物指示剂放在器械包的中心位置或者底层器械的下面。这样可以确保监测到蒸汽对整个器械包内部的穿透情况，尤其是底部和中心部分，因为这些地方是蒸汽穿透路径最长的区域。
复杂器械（如内窥镜、腹腔镜等）
内部通道放置：这些器械通常有细长的内部通道，是灭菌的难点。应将生物指示剂放置在内部通道的最深处。例如，内窥镜的活检通道或冲洗通道内部，因为蒸汽在这些狭窄的通道内流动时会受到较大的阻力，而且通道深处是最后被蒸汽充满的部分。
可拆卸部件接口处：对于器械的可拆卸部件，如腹腔镜的镜头与器械杆的接口处，也是容易残留微生物的地方。在接口周围放置生物指示剂，可以监测蒸汽对这些关键连接部位的灭菌效果。
（二）药品包装材料
瓶类包装（如玻璃瓶、塑料瓶）
内部底部放置：如果是对空瓶进行灭菌，将生物指示剂放在瓶子内部的底部。因为在灭菌过程中，蒸汽从瓶口进入，底部是蒸汽最后到达的位置。特别是对于一些形状不规则或者有一定深度的瓶子，底部的灭菌情况更需要重点监测。
瓶盖与瓶身结合处（有内塞的情况）：对于带有内塞的瓶子，如一些药用塑料瓶，在瓶盖与瓶身的结合处放置生物指示剂。这个部位可能会因为内塞的存在而影响蒸汽的完全渗透，而且如果灭菌不彻底，微生物很容易在此处滋生，从而污染瓶内的药品。
袋类包装（如药用铝塑复合袋）
袋内角落放置：对于袋类包装材料，将生物指示剂放在袋子的角落处。因为角落是蒸汽在袋内流动的末端位置，蒸汽较难充分到达。而且在实际包装过程中，角落处也可能因为折叠等情况而形成相对封闭的小空间，容易藏匿微生物。
（三）实验室用品
玻璃器皿（如烧瓶、培养皿等）
多层叠放时的中间层和底部：当玻璃器皿多层叠放进行灭菌时，除了在最上层放置生物指示剂外，更重要的是要在中间层和底部放置。因为叠放会影响蒸汽对下层器皿的穿透，中间层和底部的器皿受到的蒸汽作用相对较弱。例如，在灭菌一摞培养皿时，将生物指示剂放在最下面的培养皿内，可以监测蒸汽对最底层器皿的灭菌效果。
带有盖子的器皿内部盖子下方：对于有盖子的玻璃器皿，如烧瓶，将生物指示剂放在器皿内部盖子的下方。这个位置容易因为盖子的覆盖而使蒸汽不能很好地接触，是灭菌的一个关键监测点。
培养基
培养基瓶中心位置：如果是对未分装的培养基进行灭菌，将生物指示剂放在培养基瓶的中心位置。因为培养基是一个相对粘稠的物质，蒸汽在其中的穿透需要一定的时间和条件，中心位置是最后被蒸汽完全作用的地方。
分装后的培养基容器底部（多个小容器情况）：当培养基分装到多个小容器后进行灭菌，除了在其中一个容器的中心位置放置生物指示剂外，还应在其他容器的底部放置。这是因为在灭菌过程中，每个小容器的底部都可能因为与灭菌设备的接触或者自身的形状等因素，导致蒸汽穿透情况有所不同。
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