形态:革兰氏阳性球菌,显微镜下呈不规则葡萄串状排列(菌体分裂后不立即分离),无芽孢与鞭毛,部分菌体表面可形成明显薄荚膜(经印度墨汁负染可清晰观察)。在普通营养琼脂上形成直径 1.2-2.8mm 的金黄色不透明菌落,质地紧实、表面光滑且凸起,边缘整齐;血琼脂培养基上表现为典型 β- 溶血,菌落周围形成 2-3mm 宽的透明溶血环(溶血活性稳定,可作为鉴别特征);在含甲氧西林的选择性培养基(如 MH+4μg/mL 甲氧西林)上生长受抑制,与耐甲氧西林菌株(MRSA)形成显著区分。
生理生化:兼性厌氧微生物,最适生长温度 35-37℃(适配人体生理环境),最适 pH 值 7.0-7.5,对营养需求较低,在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均能快速生长,耐盐性较强(可在 7.5%-10% 氯化钠培养基中正常繁殖,适合选择性分离)。生化反应中,触酶试验阳性(可快速区别于链球菌),凝固酶试验阳性(能使兔血浆在 4-6 小时内凝固,判定为致病性葡萄球菌),氧化酶试验阴性,硝酸盐还原试验阳性;糖类发酵方面,可发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖(产酸不产气),不发酵阿拉伯糖、木糖、甘露醇;毒力特性上,可稳定分泌 α- 溶血毒素、肠毒素 B 及表皮剥脱毒素,生物膜形成能力较强,是模拟临床皮肤软组织感染、食物中毒等疾病的理想菌株模型,且对青霉素、头孢唑林、阿莫西林等 β- 内酰胺类药物敏感,无交叉耐药现象。
培养基:常规培养优先选用营养琼脂或 LB 培养基(满足菌体快速增殖需求);若需观察溶血特性或临床样本分离,推荐使用血琼脂培养基;进行药物敏感性试验时,需采用 MH 培养基(符合 CLSI 标准,确保药敏结果准确);选择性分离可选用含 7.5% 氯化钠的甘露醇高盐琼脂培养基(该菌株可发酵甘露醇使培养基呈黄色,便于快速筛选)。
操作:固体培养需置于 35-37℃恒温培养箱静置 18-22 小时(生长速度较快,无需延长培养时间),可形成形态完整的单菌落;液体培养采用 35-37℃、150-180rpm 摇床振荡培养 16-18 小时,培养后期菌液呈均匀浑浊状,菌浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL,且能最大程度保留毒素分泌能力与生物膜形成活性。传代次数建议控制在 5 代以内,温度波动需≤±1℃,避免因传代过多或温度异常导致毒力减弱、色素生成减少。
短期(1-2 周):取培养 18 小时的纯培养菌株(需确认金黄色菌落与 β- 溶血特性),接种至营养琼脂斜面培养基,35-37℃培养 12 小时后,密封管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3 天观察一次菌株状态,若发现菌落干燥、污染或颜色变浅,需及时重新接种纯化,防止菌株失活。
长期(3 年以上):推荐两种高效保存方法:①冷冻干燥保存法:取对数生长期菌液(OD600=0.8-1.0),与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀,分装至无菌冷冻管(每管 0.5mL),经 - 20℃预冻 3 小时、-80℃冷冻 6 小时梯度降温后进行冷冻干燥,干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存,保存期限可达 5-8 年,复苏后毒力特性保留率≥95%;②甘油冷冻保存法:将对数生长期菌液与无菌甘油(终浓度 20%)混合均匀,分装至无菌冷冻管(每管 1mL),直接放入 - 80℃冰箱保存,保存期限 3-5 年,操作简便且成本较低。长期保存需每 12 个月复苏一次,复苏后需通过革兰氏染色、菌落形态观察、凝固酶试验、溶血试验及药敏试验,全面验证菌株纯度与生理活性,确保后续实验使用效果。


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