形态：革兰氏阴性短杆菌，显微镜下呈直杆状或轻微弯曲，两端钝圆，大小约 0.5-1.0μm×1.5-3.0μm，无芽孢，多数菌株具极生单鞭毛（偶见双鞭毛），可自主运动（显微镜下呈 “直线穿梭” 样运动）。在普通营养琼脂上形成直径 1.0-2.0mm 的乳白色至淡黄色菌落，质地柔软、表面光滑湿润，边缘整齐或轻微锯齿状，部分菌株培养 48 小时后菌落中心可出现凹陷；在麦康凯培养基上呈无色半透明菌落（不发酵乳糖），在血琼脂培养基上通常无溶血现象（少数菌株呈微弱 α- 溶血），可与发酵型革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）形成显著区分。
生理生化：专性需氧微生物，最适生长温度 35-37℃（适配人体生理环境），最适 pH 值 7.0-7.4，对营养要求中等，在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可生长，能耐受低营养环境（如含 0.1% 碳源的培养基）。生化反应中，氧化酶试验阴性（区别于假单胞菌属），触酶试验阳性，硝酸盐还原试验阳性（部分菌株可还原为氮气），精氨酸双水解酶试验阴性，明胶液化试验阳性；碳源利用方面，可氧化利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇（产酸不产气，非发酵代谢模式），不利用木糖、阿拉伯糖；耐药特性上，天然对碳青霉烯类（亚胺培南）、β- 内酰胺类（青霉素、头孢菌素）抗生素耐药，对复方磺胺甲噁唑、替卡西林 - 克拉维酸敏感，可作为临床耐药谱分析的标准参照，且具较强生物膜形成能力，是医院获得性感染（如呼吸机相关性肺炎）的常见致病模型。
培养基：常规培养优先选用营养琼脂或 TSB 培养基（满足菌体稳定增殖需求）；临床样本分离或纯度验证时，推荐使用麦康凯培养基（排除发酵菌干扰）或血琼脂培养基（观察溶血特性）；进行药物敏感性试验时，需采用 MH 培养基（符合 CLSI 标准，确保药敏结果准确）；低营养环境研究可选用含 0.1% 葡萄糖的基础培养基。
操作：固体培养需置于 35-37℃、含 5% CO₂的恒温培养箱（CO₂可促进菌落形态完整）静置 24-48 小时（生长速度较发酵菌慢，需延长培养时间），可形成形态典型的单菌落；液体培养采用 35-37℃、180-220rpm 摇床振荡培养 24-30 小时（需充足氧气，振荡速率高于常规细菌），培养后期菌液呈均匀浑浊状，菌浓度可达 10⁸-10⁹CFU/mL，且能最大程度保留生物膜形成能力与耐药表型。传代次数建议控制在 4 代以内，温度波动需≤±1℃，避免因传代过多或氧气不足导致代谢特性改变、耐药基因表达异常。
短期（1-2 周）：取培养 24 小时的纯培养菌株（需确认氧化酶阴性、麦芽糖利用阳性），接种至营养琼脂斜面培养基，35-37℃培养 18 小时后，密封管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 2-3 天观察一次菌株状态，若发现菌落干燥、污染或颜色变深，需及时重新接种纯化，防止菌株因营养不足失活。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.6-0.8，需延长培养至 30 小时），与含 10% 脱脂乳 + 0.8% 酵母提取物 + 0.1% 麦芽糖的复合保护剂（麦芽糖维持代谢稳定性）按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-7 年，复苏后生物膜形成能力保留率≥90%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 25%，增强抗冻性）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-4 年，操作简便且适合实验室常规保存。长期保存需每 10-12 个月复苏一次，复苏后需通过革兰氏染色、氧化酶试验、碳源利用试验及药敏试验，全面验证菌株纯度与生理活性，确保后续实验使用效果。
客服1