形态：革兰氏阴性短杆菌，显微镜下呈直杆状，两端钝圆，大小约 0.5-0.8μm×1.0-2.0μm，无芽孢，具周生鞭毛（H 抗原），可自主运动（显微镜下呈 “穿梭样” 运动）。在普通营养琼脂上形成直径 1.0-1.5mm 的乳白色半透明菌落，质地湿润、表面光滑，边缘整齐；在 SS 选择性培养基上呈无色透明菌落（不发酵乳糖），部分菌株因产生少量硫化氢（H₂S），菌落中心出现淡黑色斑点；在麦康凯培养基上呈无色透明菌落（与发酵乳糖的大肠杆菌红色菌落显著区分），在血琼脂培养基上多表现为 γ- 溶血（不溶血），少数呈微弱 α- 溶血（草绿色溶血环）。
生理生化：兼性厌氧微生物，最适生长温度 35-37℃（适配人体肠道环境），最适 pH 值 6.8-7.4，对营养要求低，在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可快速生长，能耐受含胆盐的选择性培养基（如 SS、HE 培养基）。生化反应中，氧化酶试验阴性（肠杆菌科典型特征），触酶试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，吲哚试验阴性，甲基红试验阳性，VP 试验阴性，尿素酶试验阴性，赖氨酸脱羧酶试验阳性；糖类发酵方面，可发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇（产酸产气），不发酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖；血清型特性上，D 群特异性抗原（O 抗原）检测阳性，无伤寒沙门氏菌特有的 Vi 抗原，致病特性为引发肠道局部感染（如急性胃肠炎，表现为腹泻、腹痛），无伤寒沙门氏菌的全身侵袭能力（不引发高热、脾肿大），且携带肠道侵袭相关毒力基因（如 invA、hilA），生物膜形成能力较弱。
培养基：常规培养选用营养琼脂或 LB 培养基（满足菌体快速增殖需求）；食源性样本或临床样本分离时，优先使用 SS 选择性培养基（抑制杂菌、初步鉴别 H₂S 产生）或 HE 培养基（Hektoen Enteric Agar，增强 D 群菌株分离特异性）；药物敏感性试验需采用 MH 培养基（符合 CLSI 标准，确保药敏结果准确）；血清型鉴定需搭配 D 群沙门氏菌特异性抗血清（用于玻片凝集试验）。
操作：固体培养置于 35-37℃恒温培养箱静置 18-24 小时，可形成形态典型的单菌落（SS 培养基需重点观察是否有 H₂S 黑斑）；液体培养采用 35-37℃、150-180rpm 摇床振荡培养 16-20 小时，培养后期菌液呈均匀浑浊状，菌浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL，且能最大程度保留血清型稳定性与肠道侵袭相关毒力表型。传代次数建议控制在 5 代以内，温度波动需≤±1℃，避免因传代过多导致鞭毛丢失（影响运动性）或 H₂S 产生能力减弱。
短期（1-2 周）：取培养 18 小时的纯培养菌株（需确认 D 群血清型阳性、乳糖发酵阴性），接种至营养琼脂斜面培养基，35-37℃培养 12 小时后，密封管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3-4 天观察一次菌株状态，若发现菌落干燥、污染或在选择性培养基上生长异常，需及时重新接种纯化，防止菌株因低温保存失活。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.8-1.0），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 3 小时、-80℃冷冻 6 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-8 年，复苏后血清型准确率与毒力表型保留率≥95%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 20%）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-5 年，操作简便且适合实验室常规保存（需避免反复冻融，防止菌体破裂）。长期保存需每 12 个月复苏一次，复苏后需通过革兰氏染色、血清型凝集试验、生化反应验证（如乳糖发酵、H₂S 产生）及肠道细胞黏附试验，全面验证菌株纯度、血清型稳定性与生理活性，确保后续实验使用效果。
客服1