ATCC13311 鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium WDCM 00121）产品说明书
一、菌株基础信息
本品对应菌株为 ATCC13311 鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium），隶属于肠杆菌科沙门氏菌属，是经 ATCC（美国典型培养物保藏中心）、WDCM（世界微生物数据中心，编号 00121）通过基因测序（16S rRNA 及 invA 毒力基因鉴定）、血清型鉴定（O4,5,12:H:i:1,2）、生化特征验证及致病性检测等多维度标准化流程严格鉴定，并采用专业低温保藏技术留存的标准菌株。该菌株遗传背景清晰可追溯，经长期传代监测显示遗传特性稳定无变异，生物学特征（尤其是血清型、毒力表型）具有高度可重复性，作为全球范围内最常见的食源性致病菌之一（宿主广泛，可感染人类、鼠类、禽类等），是微生物领域沙门氏菌食源性感染机制研究、食品安全防控分析、临床与兽医诊断技术开发及抗菌药物敏感性试验的核心参照菌株。其专属保藏编号具备全球唯一性，可实现从菌株获取、实验操作到结果分析的全流程溯源，有效保障不同实验室、不同批次实验数据的精准比对，为鼠伤寒沙门氏菌相关科研项目的严谨性与食源性疾病防控工作的可靠性提供关键技术支撑。
二、生物学特性
形态特征
该菌株为革兰氏阴性短杆菌，显微镜下呈直杆状，两端钝圆，大小均一，长约 1.0-2.0μm，宽约 0.5-0.8μm，无芽孢生成，不具备荚膜结构，所有菌株均具有周生鞭毛（H 抗原），可自主运动（显微镜下呈 “穿梭样” 运动，运动性强于其他沙门氏菌亚种）。在普通营养琼脂培养基上培养后，形成的菌落呈乳白色、半透明状，质地湿润且表面光滑，边缘整齐无锯齿，直径约 1.0-2.0mm，无色素产生；在 SS 选择性培养基（Salmonella-Shigella Agar）上，因不分解乳糖，菌落呈无色透明状，部分菌株因产生硫化氢（H₂S），菌落中心出现黑色斑点（与大肠杆菌的红色菌落、志贺氏菌的无色无黑斑菌落形成明显区分）；在麦康凯培养基上，菌落呈无色透明状，培养后期无明显颜色变化，这一选择性培养基上的菌落特征（尤其是 SS 培养基上的黑斑）是该菌株初步分离鉴定的核心依据。
生理生化特性
该菌株为兼性厌氧微生物，最适生长温度适配人类及多数宿主体温，处于 35-37℃区间，最适 pH 值为 6.8-7.4，生长过程对营养要求不高，在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可良好生长，在含胆盐、煌绿的选择性培养基（如 SS、HE 培养基）中能耐受抑制并正常繁殖。生化反应试验中，氧化酶试验阴性（肠杆菌科典型特征），触酶试验阳性（分解过氧化氢产氧），硝酸盐还原试验阳性（将硝酸盐转化为亚硝酸盐），吲哚试验阴性（不产生吲哚），甲基红试验阳性（发酵葡萄糖产酸），VP 试验阴性（不产乙酰甲基甲醇），柠檬酸盐利用试验阳性（以柠檬酸盐为唯一碳源），尿素酶试验阴性（不分解尿素），赖氨酸脱羧酶试验阳性（分解赖氨酸产胺），硫化氢试验阳性（分解含硫氨基酸产生 H₂S）；糖类发酵方面，可发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇，发酵过程产酸产气；不发酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、棉子糖，这一生化反应模式（尤其是硫化氢阳性）是区分鼠伤寒沙门氏菌与猪霍乱沙门氏菌（硫化氢阴性）、大肠杆菌（乳糖发酵阳性）的关键指标。此外，该菌株携带丰富毒力基因（如 invA、hilA、sopE、spvC），具有强侵袭性与胞内增殖能力，可穿透肠道上皮细胞并在巨噬细胞内扩散，是引发人类食物中毒（急性胃肠炎）、鼠类败血症及禽类肠道感染的核心毒力基础。
三、培养与保存条件
培养条件
推荐使用营养琼脂培养基或 LB 培养基进行常规培养，用于食品 / 临床 / 兽医样本分离时优先选用 SS 选择性培养基（检测硫化氢产生）或 HE 培养基（Hektoen Enteric Agar）。接种时，固体培养采用划线接种法（分离单菌落，需 3 次以上划线以获得纯培养，便于观察硫化氢黑斑），液体培养采用接种环接种或菌悬液接种（接种量 1%-2%，体积比）；接种后，固体培养基置于 35-37℃恒温培养箱内静置培养 18-24 小时，液体培养基置于 35-37℃、150-180rpm 摇床振荡培养 16-20 小时，兼性厌氧环境即可满足生长需求，无需额外补充 CO₂。液体培养后期，菌液呈均匀浑浊状，菌浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL，且能最大程度保留菌株的鞭毛表达（运动性）与侵袭能力（如对 Caco-2 肠道上皮细胞的黏附率≥80%）。培养过程中需严格控制温度波动（不超过 ±1℃），限制传代次数（建议不超过 5 代），防止菌株因传代过多导致鞭毛丢失、硫化氢产生能力减弱或毒力基因（如 spvC）表达量下降。
保存条件
短期保存（1-2 周）：采用斜面培养基保存法，取培养 18 小时的纯培养菌株（确保硫化氢试验阳性），接种至营养琼脂斜面，35-37℃培养 12 小时后，立即转移至 4℃冰箱冷藏，每 3-4 天观察一次，若发现菌落干燥、污染或硫化氢黑斑消失，需重新接种。
长期保存（3 年以上）：推荐两种高效方法，
冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.8-1.0），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物 + 0.1% 半胱氨酸（增强硫化氢相关酶稳定性）的复合保护剂按 1:1 混合，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），梯度降温（-20℃预冻 3 小时→-80℃冷冻 6 小时）后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-8 年，复苏后硫化氢产生能力与毒力活性保留率≥95%；
甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 20%）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 3-5 年，该方法操作简便，适合实验室常规保存，但需注意避免反复冻融（每次冻融会导致 10%-15% 菌体失活）。
长期保存期间，建议每 12 个月复苏一次菌株，复苏后通过革兰氏染色（确认形态）、鞭毛染色（观察运动性）、血清凝集试验（验证 O4,5,12:H:i:1,2 血清型）、硫化氢试验（SS 培养基黑斑观察）、细胞侵袭试验（检测对 Caco-2 细胞的侵袭率），全面验证菌株纯度与生理毒力活性，确保后续使用性能稳定。
四、应用领域
食源性感染机制研究
作为食源性沙门氏菌的典型代表，ATCC13311 是研究鼠伤寒沙门氏菌跨宿主感染与食源性传播机制的核心材料。可用于解析菌株对食品基质（如鸡肉、鸡蛋、乳制品）的污染与存活规律（如低温冷藏条件下的菌体休眠机制）、对人类肠道上皮细胞的黏附 - 侵袭 - 扩散通路（如 Ⅲ 型分泌系统效应蛋白 SopE 对宿主细胞骨架的调控）、胞内增殖与免疫逃逸机制（如 SPI-2 毒力岛编码蛋白对巨噬细胞杀菌功能的抑制）；同时可用于探究食源性传播途径（如交叉污染、未煮熟食品摄入）、宿主特异性差异（如对人类与鼠类肠道黏膜的定植能力差异），为食源性沙门氏菌感染防控策略（如食品加工环节杀菌工艺优化、冷链物流微生物控制）及疫苗研发（如口服减毒活疫苗、黏膜佐剂疫苗）提供基础数据支持。
诊断试剂研发与质量控制
在诊断试剂领域，该菌株可用于鼠伤寒沙门氏菌核酸检测试剂盒（如 PCR 检测 O 抗原基因 rfbJ、H 抗原基因 fliC、毒力基因 invA/spvC）、抗原检测试剂盒（如免疫层析法检测 O4,5,12 复合抗原或 H:i 抗原）、血清学检测试剂（如人类感染抗体 ELISA 试剂盒、禽类检疫抗体试纸条）的研发与性能验证。通过检测试剂的灵敏度（最低检测限≤10²CFU/mL，适配食品样本低浓度污染检测）、特异性（无交叉反应，排除肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌干扰）、批间一致性（CV≤5%），确保食品安全检测机构可快速筛查污染食品，临床实验室可及时诊断人类感染病例，兽医实验室可高效开展禽类 / 鼠类疫病检疫。同时，可作为食品 / 临床 / 兽医微生物实验室检测方法（如选择性培养、生化鉴定、血清凝集、实时荧光 PCR）的质量控制菌株，定期验证检测方法的准确性（如 SS 培养基对食品样本中菌株的回收率≥85%），避免因方法误差导致的食品安全风险漏判或临床感染误诊。
抗菌药物研究与食品安全防控
在抗菌药物研究领域，该菌株可作为抗菌药物敏感性试验的标准参照菌株，采用肉汤稀释法或纸片扩散法（Kirby-Bauer 法），检测氟喹诺酮类（环丙沙星、左氧氟沙星）、头孢菌素类（头孢曲松、头孢他啶）、氨基糖苷类（庆大霉素、阿米卡星）、磺胺类（复方磺胺甲噁唑）等临床 / 食品相关抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC），建立鼠伤寒沙门氏菌的药敏判断标准，为临床治疗（如免疫低下人群败血症）与食品动物养殖（如禽类肠道感染）合理用药提供依据，尤其可用于监测耐药菌株（如氟喹诺酮耐药株、ESBLs 产酶株）的耐药机制与扩散规律。在食品安全防控领域，可用于食品杀菌技术效果验证（如高温杀菌、辐照杀菌、天然防腐剂抑菌效果），评估不同工艺对菌株的杀灭率（如 70℃加热 10 分钟杀灭率≥99.99%）；同时可用于食品供应链微生物风险评估（如模拟运输过程中菌株的生长速率），助力构建从 “农田到餐桌” 的全链条食品安全防控体系。
五、安全注意事项
该菌株为高致病性食源性微生物（生物安全二级 BSL-2，部分国家对多重耐药株列为 BSL-2+），可通过消化道（食用污染食品 / 水源）、接触（处理污染样本）传播，引发人类急性胃肠炎（呕吐、腹泻、发热，儿童与老人易发展为败血症）、动物肠道感染与败血症，操作时需严格遵守 BSL-2 实验室规程：
1.个人防护：穿戴无菌乳胶手套、N95 口罩、护目镜、一次性防护服，处理高浓度菌液（如离心、超声破碎）或食品污染样本（如鸡肉匀浆、蛋液）时需佩戴面屏与防滑鞋套，避免皮肤黏膜直接接触；
2.操作限制：所有接种、菌液转移、样本匀浆、离心等操作需在生物安全柜内完成，禁止在开放台面操作；振荡培养需使用密封摇瓶，离心时使用带盖离心管并平衡，避免产生含菌气溶胶（气溶胶可存活 2-3 小时，易引发呼吸道感染）；
3.废弃物处理：使用过的培养基、离心管、接种环、食品样本残渣需装入耐高温生物安全袋，密封后经 121℃、30 分钟高压蒸汽灭菌处理（含高浓度菌液或耐药株的废弃物需延长灭菌时间至 45 分钟）；一次性防护用品灭菌后按医疗废弃物规范处置；生物安全柜内壁、实验台面、离心机等仪器设备使用后，用 0.5% 次氯酸钠溶液或 0.3% 过氧乙酸溶液擦拭消毒，作用 30 分钟后用无菌水清洁，每周对生物安全柜进行 HEPA 过滤器完整性检测；
4.应急处理：若菌液泼洒，立即关闭生物安全柜风机，撤离实验室人员，隔离污染区域，30 分钟后由专业人员穿戴正压防护服进入，用浸有 0.5% 次氯酸钠的纱布覆盖污染表面 30 分钟后清理，清理后对污染区域进行环境采样检测；若人员皮肤接触，立即用生理盐水冲洗 15 分钟 + 碘伏消毒；若吸入气溶胶或误食，立即就医并告知医生菌株接触史，临床可使用头孢曲松或环丙沙星进行预防性治疗。
菌株需专人管理，建立 “双人双锁” 储存制度，储存位置明确标识 “高致病性食源性致病菌（鼠伤寒沙门氏菌 WDCM 00121）”，远离食品、水源、动物饲养区及儿童活动区域。领用需填写《ATCC13311 鼠伤寒沙门氏菌领用登记表》，详细记录领用人员（需具备 BSL-2 操作资质）、领用时间、领用数量、使用用途（仅限科研 / 检测 / 教学，禁止用于生物武器相关研究）、使用地点及归还时间；严禁将菌株转让给无资质单位或个人，不得擅自扩大培养菌株或用于食品污染模拟实验后未经灭菌直接排放；涉及耐药株研究时，需额外遵守国家抗菌药物耐药性监测与管理相关规定，防止耐药基因扩散。
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