ATCC19945 鸡白痢沙门氏菌（Salmonella pullorum）产品说明
一、菌株基础信息
本品对应菌株为 ATCC19945 鸡白痢沙门氏菌（Salmonella pullorum），隶属于肠杆菌科沙门氏菌属，是经 ATCC（美国典型培养物保藏中心）通过基因测序（16S rRNA 及 invA 毒力基因鉴定）、血清型鉴定（O9,12:H-）、生化特征验证及禽类致病性检测等多维度标准化流程严格鉴定，并采用专业低温保藏技术留存的标准菌株。该菌株遗传背景清晰可追溯，经长期传代监测显示遗传特性稳定无变异，生物学特征（尤其是宿主特异性、血清型）具有高度可重复性，作为典型的禽类专用致病菌（主要宿主为鸡，雏鸡易感），是微生物领域沙门氏菌禽类感染机制研究、鸡白痢疫病防控分析、兽医诊断技术开发及兽用抗菌药物敏感性试验的核心参照菌株。其专属菌株编号具备全球唯一性，可实现从菌株获取、实验操作到结果分析的全流程溯源，有效保障不同实验室、不同批次实验数据的精准比对，为鸡白痢沙门氏菌相关科研项目的严谨性与禽类养殖业疫病防控工作的可靠性提供关键技术支撑。
二、生物学特性
形态特征
该菌株为革兰氏阴性短杆菌，显微镜下呈直杆状，两端钝圆，大小均一，长约 1.0-2.0μm，宽约 0.5-0.7μm，无芽孢生成，不具备荚膜结构，无鞭毛（H 抗原缺失，与多数沙门氏菌差异显著），故无自主运动性（显微镜下观察呈静止状态）。在普通营养琼脂培养基上培养后，形成的菌落呈乳白色、半透明状，质地湿润且表面光滑，边缘整齐无锯齿，直径约 0.8-1.5mm，无色素产生；在 SS 选择性培养基（Salmonella-Shigella Agar）上，因不分解乳糖且产生硫化氢（H₂S），菌落呈无色透明状，菌落中心形成黑色斑点（与大肠杆菌的红色菌落、无 H₂S 产生的肠道菌形成区分）；在麦康凯培养基上，菌落呈无色透明状，培养后期无颜色变化，这一 “无鞭毛 + SS 培养基黑斑” 的形态组合，是该菌株初步分离鉴定的核心依据（区别于鼠伤寒沙门氏菌的运动性特征）。
生理生化特性
该菌株为兼性厌氧微生物，最适生长温度适配禽类体温，处于 37-39℃区间，最适 pH 值为 6.8-7.4，生长过程对营养要求不高，在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可良好生长，在含胆盐、煌绿的选择性培养基（如 SS、HE 培养基）中能耐受抑制并正常繁殖（但生长速度较鼠伤寒沙门氏菌慢，需延长培养至 24-36 小时）。生化反应试验中，氧化酶试验阴性（肠杆菌科典型特征），触酶试验阳性（分解过氧化氢产氧），硝酸盐还原试验阳性（将硝酸盐转化为亚硝酸盐），吲哚试验阴性（不产生吲哚），甲基红试验阳性（发酵葡萄糖产酸），VP 试验阴性（不产乙酰甲基甲醇），柠檬酸盐利用试验阴性（不能以柠檬酸盐为唯一碳源，与多数沙门氏菌差异显著），尿素酶试验阴性（不分解尿素），赖氨酸脱羧酶试验阳性（分解赖氨酸产胺），硫化氢试验阳性（分解含硫氨基酸产生 H₂S）；糖类发酵方面，可发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇，发酵过程产酸产气；不发酵乳糖、蔗糖、山梨醇、阿拉伯糖，这一生化反应模式（尤其是柠檬酸盐利用阴性、无鞭毛），是区分鸡白痢沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌（柠檬酸盐阳性、有鞭毛）、猪霍乱沙门氏菌（H₂S 阴性）的关键指标。此外，该菌株携带禽致病性相关毒力基因（如 invA、spaN、sifA），具有强侵袭性，可穿透鸡肠道上皮细胞并在肝脏、脾脏等内脏器官定植，是引发雏鸡急性败血症（死亡率高达 90%）、成年鸡慢性带菌的核心毒力基础。
三、培养与保存条件
培养条件
推荐使用营养琼脂培养基或 LB 培养基进行常规培养，用于禽类样本（如雏鸡肝脏、脾脏、蛋清、种蛋）分离时，优先选用 SS 选择性培养基（检测 H₂S 产生）或麦康凯培养基（排除大肠杆菌干扰）。接种时，固体培养采用划线接种法（分离单菌落，需 3 次以上划线，因菌落较小需仔细观察），液体培养采用接种环接种或菌悬液接种（接种量 2%-3%，体积比，补偿生长速度慢的特性）；接种后，固体培养基置于 37-39℃恒温培养箱内静置培养 24-36 小时，液体培养基置于 37-39℃、150-180rpm 摇床振荡培养 20-24 小时，兼性厌氧环境即可满足生长需求，无需额外补充 CO₂。液体培养后期，菌液呈均匀浑浊状（浊度较鼠伤寒沙门氏菌低），菌浓度可达 10⁸-10⁹CFU/mL，且能最大程度保留菌株对鸡胚的侵袭能力（如鸡胚接种后死亡率≥80%）。培养过程中需严格控制温度波动（不超过 ±1℃），限制传代次数（建议不超过 4 代），防止菌株因传代过多导致 H₂S 产生能力减弱或禽致病性基因（如 sifA）表达量下降。
保存条件
短期保存（1-2 周）：采用斜面培养基保存法，取培养 24 小时的纯培养菌株（确保 H₂S 试验阳性、无鞭毛），接种至营养琼脂斜面，37-39℃培养 18 小时后，立即转移至 4℃冰箱冷藏，每 2-3 天观察一次，若发现菌落干燥、污染或 H₂S 黑斑变淡，需重新接种（因该菌株在低温下存活能力较弱）。
长期保存（3 年以上）：推荐两种高效方法，
1.冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.6-0.8，因生长慢需延长培养至 24 小时），与含 10% 脱脂乳 + 0.8% 酵母提取物 + 0.1% 半胱氨酸（增强 H₂S 相关酶与毒力蛋白稳定性）的复合保护剂按 1:1 混合，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），梯度降温（-20℃预冻 4 小时→-80℃冷冻 8 小时，缓慢降温减少细胞损伤）后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-7 年，复苏后对雏鸡的致病性保留率≥90%；
2.甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 25%，高于常规浓度以增强抗冻性）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 3-4 年，该方法操作简便，适合兽医实验室常规保存，但需注意每 12 个月复苏一次（较其他沙门氏菌复苏频率高），避免菌体长期冷冻失活。
长期保存期间，复苏后需通过革兰氏染色（确认形态）、鞭毛染色（验证无鞭毛）、血清凝集试验（验证 O9,12:H - 血清型）、H₂S 试验（SS 培养基黑斑观察）、鸡胚致病性试验（检测鸡胚死亡率），全面验证菌株纯度与禽致病性活性，确保后续使用性能稳定。
四、应用领域
禽类感染机制研究
作为鸡白痢沙门氏菌的标准菌株，ATCC19945 是研究其禽类特异性感染机制的核心材料。可用于解析菌株对雏鸡肠道上皮细胞的黏附 - 侵袭机制（如黏附蛋白 SipA 与鸡肠道细胞受体的结合特性）、内脏器官（肝、脾）定植规律（如巨噬细胞内增殖能力）、垂直传播途径（种蛋污染机制，如蛋壳穿透与蛋清内存活规律）；同时可用于探究雏鸡与成年鸡的免疫应答差异（如雏鸡先天免疫缺陷导致高死亡率的分子机制）、菌株免疫逃逸策略（如抑制鸡巨噬细胞 NO 产生），为鸡白痢疫病防控策略（如雏鸡早期免疫、种鸡净化）及疫苗研发（如减毒活疫苗、亚单位疫苗）提供基础数据支持，助力降低禽类养殖业因鸡白痢导致的雏鸡死亡与产蛋率下降损失。
兽医诊断试剂研发与质量控制
在兽医诊断试剂领域，该菌株可用于鸡白痢沙门氏菌核酸检测试剂盒（如 PCR 检测 O 抗原基因 rfbS、毒力基因 invA/sifA）、抗原检测试剂盒（如免疫层析法检测 O9,12 复合抗原）、血清学检测试剂（如种鸡群抗体 ELISA 试剂盒、全血平板凝集试验抗原）的研发与性能验证。通过检测试剂的灵敏度（最低检测限≤10³CFU/mL，适配种蛋低浓度污染检测）、特异性（无交叉反应，排除鸡伤寒沙门氏菌、大肠杆菌干扰）、批间一致性（CV≤5%），确保兽医实验室可快速诊断鸡白痢疫情，种鸡场可高效开展种鸡净化（如淘汰带菌鸡）与雏鸡早期筛查（如出壳后 24 小时检测）。同时，可作为兽医微生物实验室检测方法（如选择性培养、生化鉴定、血清凝集）的质量控制菌株，定期验证检测方法的准确性（如 SS 培养基对种蛋样本中菌株的回收率≥80%），避免因方法误差导致的疫病扩散或种鸡净化不彻底。
兽用抗菌药物研究与禽类疫病防控
在兽用抗菌药物研究领域，该菌株可作为抗菌药物敏感性试验的标准参照菌株，采用肉汤稀释法检测氟苯尼考、恩诺沙星、头孢噻呋、多西环素、阿莫西林等兽医常用抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC），建立鸡白痢沙门氏菌的药敏判断标准，为雏鸡临床治疗（如急性败血症）与种鸡场预防性用药提供依据，尤其可用于监测耐药菌株（如氟喹诺酮耐药株、β- 内酰胺类耐药株）的耐药机制（如 gyrA 基因突变、blaTEM 基因携带）与扩散规律，避免滥用抗菌药物导致的耐药性问题。在禽类疫病防控领域，可用于鸡白痢疫苗免疫效果评估（如检测免疫雏鸡的抗体效价与攻毒保护率）、养殖场环境消毒效果验证（如评估次氯酸钠、过氧乙酸对环境中菌株的杀灭率≥99.99%）；同时可用于种蛋消毒工艺优化（如温汤浸蛋、甲醛熏蒸参数调整），助力构建 “种鸡净化 - 雏鸡免疫 - 环境消毒” 的全链条鸡白痢防控体系。
五、安全注意事项
该菌株为禽类专用致病菌，对人类致病性极低（仅免疫功能严重低下人群可能引发局部感染），但对禽类（尤其是雏鸡）致病性极强，操作时需遵守生物安全二级（BSL-2）实验室操作规程，处理禽类污染样本（如雏鸡内脏、种蛋、粪便）或高浓度菌液时需加强防护：
1.个人防护：穿戴无菌乳胶手套、医用外科口罩、护目镜、一次性防护服，处理禽类样本匀浆或离心高浓度菌液时，需佩戴面屏与防滑鞋套，避免样本飞溅接触皮肤黏膜；
2.操作限制：所有接种、菌液转移、样本处理（如内脏研磨）需在生物安全柜内完成，禁止在开放台面操作；振荡培养使用密封摇瓶，离心时使用带盖离心管并平衡，避免产生含菌气溶胶（气溶胶对禽类有传播风险，对人类无显著危害）；
3.废弃物处理：使用过的培养基、离心管、接种环、禽类样本残渣需装入耐高温生物安全袋，密封后经 121℃、30 分钟高压蒸汽灭菌处理（含耐药株的废弃物需延长灭菌时间至 45 分钟）；一次性防护用品灭菌后按医疗废弃物规范处置；生物安全柜内壁、实验台面、离心机等仪器设备使用后，用 0.5% 次氯酸钠溶液或 0.3% 过氧乙酸溶液擦拭消毒，作用 30 分钟后用无菌水清洁，每月对生物安全柜进行 HEPA 过滤器完整性检测；
4.应急处理：若菌液泼洒或禽类样本泄漏，立即用浸有 0.5% 次氯酸钠的纱布覆盖污染表面 30 分钟后清理，清理后对污染区域再次消毒；若人员皮肤接触污染样本，立即用生理盐水冲洗 15 分钟 + 碘伏消毒，无需特殊医疗处理（因对人类致病性低）；若污染禽类养殖环境，需立即对该区域禽类进行隔离检疫，防止疫病扩散。
菌株需专人管理，建立 “双人双锁” 储存制度，储存位置明确标识 “禽类高致病性致病菌（鸡白痢沙门氏菌 ATCC19945）”，远离禽类养殖区、种蛋储存库及食品加工区域。领用需填写《ATCC19945 鸡白痢沙门氏菌领用登记表》，详细记录领用人员（需具备 BSL-2 操作资质与兽医相关背景）、领用时间、领用数量、使用用途（仅限科研 / 兽医检测，禁止用于禽类恶意感染实验）、使用地点及归还时间；严禁将菌株转让给无资质单位或个人，不得擅自扩大培养菌株或用于禽类养殖场环境（需经农业农村部门审批）；涉及耐药株研究时，需遵守国家兽用抗菌药物耐药性监测与管理规定，防止耐药基因通过环境传播至其他禽类致病菌。
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